多发性骨髓瘤的两种皮下移植瘤动物模型的构建原创

科研CRO

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多发性骨髓瘤 ( multiple myeloma，MM) 是一种浆细胞恶性增殖性疾病，发病率在血液系统肿瘤中位列第二。今天梳理两种皮下成瘤的方法。

一、RPMI8226骨髓瘤细胞悬液接种于裸鼠皮下的方法

1、实验动物：裸鼠，5~6周龄，雌性，体重17~20g

2、细胞株：人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞株

3、肿瘤细胞株的培养：人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226，培养于10%胎牛血清、80U/L青霉素和0.08mg/mL链霉素的RPMI 1640培养液中，置37℃、5%CO2细胞培养箱中，约2~3d传代1次，实验用对数生长期细胞，制备单细胞悬液。

4、建立RPMI8226裸鼠皮下移植瘤模型：

接种前24h用3Gy剂量的X射线照射预处理裸鼠，皮下注射2×107肿瘤细胞，成瘤率接近50%~70%

5、人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型成功建立的确认

肉眼观察接种肿瘤细胞位置皮下出现与裸鼠皮肤颜色一致的结节，且随时间逐渐增大；在裸鼠濒死或死亡，或者肿瘤生长已超过观察时间（如6~7周）裸鼠仍未死亡时，处死裸鼠，取其皮下结节进行病理检测（HE染色），证实皮下结节为浆细胞瘤组织。

6、荷瘤裸鼠各项指标的监测

（1）一般情况观察  每天观察各组小鼠的精神、活动等情况，每2~3d记录裸鼠的体重、肿瘤体积大小、肿瘤破溃情况及死亡例数。

（2）肿瘤体积测量   

（3）血清免疫固定电泳检测  处死裸鼠前，摘眼球取血，不抗凝，分离血清进行免疫固定电泳。

7、荷瘤裸鼠皮下结节及各器官的病理检测

处死裸鼠后，取裸鼠的肿瘤组织及各器官（肝、脾、肺、肾）， 10%中性福尔马林固定过夜，常规脱水、透明、渗蜡、包埋、切片后进行HE染色。

二、MPC-11骨髓瘤细胞液接种于BALB/c皮下的方法

1、实验动物：BALB/c，6 -8周，雌性，体重18~20g

2、细胞株：MPC-11骨髓瘤细胞株

3、肿瘤细胞株培养：将MPC11加入含10%胎牛血清加双抗（青霉素100U/ml, 链霉素100mg/L）的RPMI1640培养液内，置于37℃、50% CO2、饱和湿度培养箱中培养。稳定传代3、4代后，取对数生长期细胞，用RPMI1640培养液调整细胞密度备用。用台盼蓝染细胞确定活细胞数在95%以上。

4、建立MPC-11BALB/c皮下移植瘤模型：

MPC-11荷瘤细胞数量是6 ×105个瘤细胞为荷瘤浓度。

5、人多发性骨髓瘤小鼠动物模型成功建立的确认

在皮下结节出现的高峰期（荷瘤第12天）随机将5只荷瘤后出现皮下结节的小鼠处死，取其皮下结节进行病理检测，包括HE染色和免疫组织化学染色（选择与MPC-11骨髓瘤细胞株同源的CD138, κ轻链）以证实皮下结节为浆细胞瘤组织来源。同时分离这些小鼠的血清进行免疫固定电泳的检测, 以电泳出现单克隆免疫球蛋白条带（IgG, κ轻链）作为造模成功的金标准。

6、多发性骨髓瘤小鼠各项指标的监测

（1）一般情况观察  每天观察各组小鼠的精神、食欲、活动等情况，每周记录小鼠的体重、肿瘤体积大小、肿瘤破溃情况和死亡例数。

（2）Hb检测　在荷瘤前和荷瘤后15天、30天随机选取5只小鼠断尾取血20μl测Hb。

（3）血清免疫固定电泳的监测  针对血清中的IgG和κ轻链在荷瘤第5、7、9、11、12、35、65天进行小鼠血清免疫固定电泳的动态监测。

（4）血清IL-6水平的监测 在荷瘤第30和60天采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测小鼠血清 IL-6水平。

注：监测项目需要根据自己的实验目的来确定。