世界上现存蛇类大约有3000余种,其中毒蛇超过600种,致命性毒蛇近200种,分为18个科、大约450多个属。蛇类主要分布于北纬67°到南纬40°的区域内,其中种类和数量最多的分布在亚热带和热带地区。据报道,我国每年毒蛇咬伤事件可达10万人次,因蛇咬伤致残而丧失劳动能力者占25%~30%,各类蛇咬伤死亡率达5%~10%,严重威胁着人们的生命健康。今天我们一起梳理银环蛇咬伤模型。 一、实验动物
KM小鼠和SD大鼠。 二、实验方案
1、银环蛇毒的KM小鼠半数致死量(LD50)为0.09mg /kg,测定本实验银环蛇干毒KM小鼠LD50,根据公式换算为银环蛇毒的SD大鼠LD50 ; 按银环蛇毒的SD大鼠的LD50倍数,予SD大鼠皮下注射,建立银环蛇毒致SD大鼠肌无力模型,确定模拟临床的最佳银环蛇干毒剂量。
按Lennon等的分级法将肌无力症状分为4级: 0级,没有肯定肌无力表现; 1级,嘶咬无力,四肢力量较差,在光滑地面上前肢打滑,活动减少; 2级,明显无力,休息时脊背呈隆起姿势,头尾下垂、前肢弯曲,动作不协调; 3级,严重无力表现,无嘶咬动作,肌肉震颤,呼吸困难,濒死或死亡。
2、用低频重复神经电刺激检测银环蛇毒致SD大鼠肌无力模型的腓肠肌电改变; 解剖模型大鼠,观察膈肌及腓肠肌病理改变。 实验流程见图1。
图1 银环蛇毒的KM小鼠LD50的测定 三、建立银环蛇毒致SD大鼠肌无力的中毒动物模型
确定银环蛇毒致SD大鼠肌无力模型的剂量 (1)银环蛇毒最佳剂量是3倍SD大鼠LD50,为0.24mg /kg给 SD大鼠皮下注射已配置的银环蛇毒溶液(浓度10μg /mL)。
SD大鼠于1.5h左右出现呼吸困难,2h左右出现张口呼吸,模拟临床1~4h出现呼吸衰竭,用于早期救治银环蛇干毒相关性早期肌无力的基础研究。
(2)进行RNS检查,SD 大鼠为给予0.24mg/kg银环蛇毒注射的 SD大鼠,行RNS检查,中毒后,可见肌电递减改变。
(3)病理结果 高倍镜(×200)下模型组膈肌及腓肠肌细胞肿胀、核排列紊乱。对照组的膈肌与腓肠肌细胞形态未见异常。
|