IVD知识文库系列-11.15微生物检测の真菌开篇

纳兰烙烙

编者按：

本次章节新增篇章，为真菌分篇篇章。包含了：真菌相关的知识点。

关键词：医学真菌。

其意义在于概括了真菌概论。

一

真菌概述

节选《真菌性皮肤病》

上海交通大学医学院

真菌

真菌（fungus）：是一类具有细胞壁和典型细胞核结构，缺乏叶绿素，不分根、茎、叶，能进行无性或有性繁殖的真核细胞型微生物。

胞壁不含肽聚糖，故不受青霉素、头孢菌素的影响；胞膜含固醇对二性霉素B、制霉菌素（与固醇结合）、酮康唑（抑制固醇合成）敏感。

组成：核膜和核仁(细胞核)

完整的细胞器(胞浆)

单细胞（少数）或多细胞（多数）

生存方式：腐生或寄生

繁殖方式：有性或无性

多数对人类有益，少数有害

分布广泛、种类繁多

少数有害：医学（病原）真菌400种，常见的有50～100种。

目前真菌病呈明显上升趋势：

1.抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的滥用

2.器官移植、介入性治疗等新型技术的开展

3.艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病造成宿主免疫功能低下

二

真菌分类

形态：多种多样

有典型的核结构和细胞器

按形态、结构分为两类：

单细胞真菌

多细胞真菌

单细胞真菌

圆形或椭圆形

包括：酵母型真菌：无菌丝，母细胞以芽生方式繁殖，菌落与细菌的菌落相似。

类酵母型真菌：母细胞以芽生方式繁殖，出芽产生的芽生孢子持续延长，但不断裂、不与母细胞脱离，产生相互连接成藕节状较长的细胞链，可伸入培养基内，称假菌丝 。

多细胞真菌

基本结构：菌丝和孢子

菌丝（hypha）：孢子生出嫩芽，称为芽管管逐渐延长呈丝状，称为菌丝。

孢子（spore）：真菌的生殖结构，由生殖菌丝产生。

菌丝体（mycelium）：菌丝交织成团。

根据功能不同分为：

营养菌丝（vegetative mycelium）

气生菌丝（aerial mycelium）

生殖菌丝（reproductive mycelium）

根据隔膜的消长分为：

有隔菌丝（大部分病原性丝状菌）

无隔菌丝

根据形态不同分为：

单纯菌丝

球拍状菌丝

破梳状菌丝

螺旋状菌丝

结节状菌丝

鹿角状菌丝等

孢 子

生殖结构，由生殖菌丝产生，是鉴定和分类的主要依据。

无性孢子

不经两性细胞配合而产生的孢子。病原性真菌大多数产生无性孢子。

o叶状孢子（thallospore）

芽生孢子（blastospore）

关节孢子（arthrospore）

厚膜孢子（chlamydospore）

o分生孢子 （conidia）

大分生孢子（macroconidia）

小分生孢子（microconidia）

o孢子囊孢子（sporangiospore）

有性孢子

细胞间配合（质配和核配）后产生，绝大多数为非致病性真菌所具有。

o接合孢子

o子囊孢子

o担（子）孢子

三

真菌的繁殖与培养

依靠孢子及菌丝进行繁殖

繁殖方式：

无性繁殖——真菌的主要繁殖方式

有性繁殖

无性繁殖主要包括：

芽生 母细胞发芽产生。常见于酵母型和类酵母型真菌。

裂殖 母细胞二分裂产生。如裂殖酵母。

芽管 萌发芽管，伸延形成菌丝。

隔殖 分生孢子梗形成一隔膜，原生质浓缩形成新孢子。

培养特性

培养基：营养要求不高，常用沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、察氏培养基（Czapek-Dox Agar）、脑心浸膏琼脂培养基（BHI）

温度：

37℃（酵母型和类酵母型真菌）

25～28℃（丝状真菌）

最适pH：4.0～6.0

生长速度：多数病原性真菌生长缓慢

四

菌落

1.酵母型菌落

芽生孢子，无菌丝。如新生隐球菌

2.类酵母型菌落（酵母样菌落）

呈藕节状细胞链的假菌丝。

如白假丝酵母

3.丝状型菌落

菌落形态和颜色可作为鉴定、分类的参考依据。见于大多数丝状真菌

o变异性

形态、结构、及生理性状（毒力）等。

o抵抗力

对热抵抗性不强（孢子60℃经1 h即杀灭）耐受：干燥、紫外线及多种化学药物等敏感：1％ ～3％石炭酸、2.5％碘酊及10％甲醛液。

五

真菌感染

真菌感染

o原发性感染：

致病性真菌

球孢子菌（coccidiodes）

皮炎芽生菌（blastomyoes dermatitidis）

组织胞浆菌（histoplasma）

马尔尼菲青霉（penicillium marneffei）等

o继发性感染：

机会致病性真菌

机体免疫功能显著下降时发生

真菌性超敏反应

按性质分类：

感染性超敏反应： 感染，Ⅳ型

接触性超敏反应： 吸入或食入，Ⅰ～Ⅳ型

按部位分类:

皮肤超敏反应

呼吸道超敏反应

消化道超敏反应

真菌毒素中毒

o来源：真菌代谢产生毒素，存在于农作物、食物或饲料中

o表现：

1. 肝、肾、神经、造血系统等损伤

2. 致癌（黄曲霉毒素等）

真菌免疫性

o非特异性免疫

1.皮肤粘膜屏障作用

2.正常菌群拮抗作用（白假丝酵母菌）

3.吞噬作用

o特异性免疫

1.细胞免疫

2.体液免疫

六

真菌实验室检查

实验室检查

1.样本采集：

o浅部：鳞屑、病发或甲屑

o深部：痰、脓、血、尿、便、脑脊液、胸水及分泌物等

o注意：标本应足量、新鲜严格无菌操作资料应齐全

2.形态学检查：

o直接镜检：

标本处理（10%KOH）

涂片染色（革兰染色、墨汁染色）

o分离培养：

含抗生素和放线菌酮的SDA、PDA

酵母型和类酵母型真菌： 37℃，革兰染色

丝状真菌：25℃，乳酸酚棉兰染色

3.血清学检测：

真菌抗原、代谢产物及机体产生的抗体

o抗原：1,3-β-D-葡聚糖（G试验）

甘露聚糖（EIA法或FACE）

半乳甘露聚糖（GM试验）

隐球菌荚膜多糖（乳胶凝聚试验）

o抗体：甘露聚糖抗体（凝胶对流电泳）

烯醇化酶抗体（凝集试验）

马尔尼菲青霉抗体（ELISA法）

o代谢产物：

D-阿拉伯糖醇（酶荧光法）

烯醇化酶（斑点印迹法或DFA）

4.核酸检测：

o核酸G+C mol%测定

oPCR相关技术：巢氏PCR、复合PCR、荧光PCR等

oDNA指纹技术：RFLP、DGGE、SSCP等

o核酸杂交：原位杂交、RDB、基因芯片技术等

oDNA特殊序列分析：ITS、LSU、TEF、线粒体cyt b、COⅠ和COⅡ、b-微管蛋白等基因

5.抗真菌药物

o皮肤癣菌：

注意清洁卫生，避免接触，局部使用特比萘芬、酮康唑、咪康唑或克霉唑

o深部真菌病：

去除各种诱因，提高抵抗力，常用氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、5-氟胞嘧啶、卡泊芬净、米卡芬净等

o真菌性食物中毒：严禁食用发霉食品