冰冻混合人血清酶校准品的赋值

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酶学标准化可以定义为不依赖于分析原理、分析方法和分析系统而获得可比结果的性能lJ。实现标准化需要有原级参考物质或公认的参考方法；常规测量程序需与参考测量程序有相同的分析特异性；常规校准品应具有溯源性与互通性。。自2002年，国际临床化学与检验医学联合会(IFCC)相继颁布了7种酶37的参考测量程序，这些定义了特定酶活性测定条件的参考测量程序构成了计量学溯源链的顶端。目前关键问题是获得具有溯源性与互通性的酶校准品。采用经参考测量程序赋值的人血清作为酶校准品是建立溯源性的可选方法J。北京市临床检验中心(BCCL)组织了酶学参考实验室网络为冰冻混合人血清酶校准品赋值。本文拟介绍酶校准品的赋值过程，并就其应用问题进行探讨。

1材料与方法

1．1主要仪器及试剂

日立7600全自动生化分析仪；校准品(批号155211-03，德国Roche公司)；聚丙稀无菌锥形离心管(美国康宁公司)；量简、烧杯等符合国家A级标准的玻璃器皿。

1．2血清的收集、制备与保存

收集无乳糜、溶血的患者血清。分别收集丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、^y一谷氨酰转移酶(GGT)3项中至少一项大于300U／L的血清；收集肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)2项中至少一项大于500U／L的血清；于一80保存。由北京航天总医院参考实验室按照酶学标准物质制备程序制备所需浓度水平的混合人血清酶校准品，浓度控制在参考区间上限的2～5倍，分装于1mL冻存管中。BCCL1号校准品(BCal一1)包括ALT、AST、GGT3项；BCCL2号校准品(BCal-2)包括CK、LDH2项。样品经均匀性检验符合要求。于一80cIC保存。

1．3酶学参考实验室

网络酶学参考实验室网络由具备以下资质的实验室组成：(1)建立并运行IFCC推荐的ALT、AST、GGT、CK、LDH5项酶的参考测量程序；(2)分析国际有证标准物质以验证测量的准确性；(3)参加IFCC组织的国际参考实验室室间质评计划(RELA)或国内候选参考实验室室间比对计划。共筛选国内6家符合上述条件的实验室组成酶学参考实验室网络，分别为首都医科大学附属北京朝阳医院、北京航天总医院、首都医科大学附属北京世纪坛医院、中国医学科学院北京协和医院、北京利德曼公司、四川迈克公司。

1．4冰冻混合人血清酶校准品赋值

统一用IFCC颁布的血清酶参考测量程序驯进行测量，待赋值血清在复融后4h内完成测量。赋值实验室在正式赋值前7d内测量国际酶学有证参考物质(ERM)，以“各次测量结果均在ERM的靶值±扩展不确定度范围内”来确认其测量能力。

在对冰冻混合人血清酶校准品赋值过程中进行质控，统一用罗氏校准品作为质控品，以2日内10次测量结果的均值()作为质控图中心线，以±3％元作为失控限，每批测量前、后均进行质控，并确保质控在控。记录质控结果。

对冰冻混合人血清酶校准品进行赋值时，每种酶进行4个批次的测量，每个批次测量3次，共计测量12次。每日进行2个批次测量，上、下午各进行1次，共计测量2d；每批次3次测量使用同一支样品，不同批次测量更换另一支样品，记录测量结果。BCCL收集汇总各实验室测量结果并进行统计。以各实验室l2次测量结果的均值作为该室的血清定值，再以6家实验室血清定值的均值(剔除±3．5％元以外数据)作为最终的冰冻混合人血清酶校准品的赋值。

2结果

6家实验室

分别以字母A、B、C、D、E、F代表(与上文实验室排序无对应关系)。5项酶室内质控数据统计结果见表1。冰冻混合人血清酶校准品5种酶检测的统计结果见表2。BCCL冰冻混合人血清酶校准品赋值结果室间变异与RELA室问变异的比较结果见表3。6家实验室冰冻混合人血清酶校准品AIJT、AST、GGT、CK、LDH5项酶的赋值结果分另0为(112．16±1．94)、(101．37±0．37)、(175．74±1．82)、(370．92±4．48)、(309．69±1．78)U／L。室内质控的变异系数(CV)分别为0．33％～1．40％、0．50％～1．24％、0．37％～1．49％、0．50％～1．30％、0．61％～1．11％。冰冻混合人血清酶校准品赋值的室间变异分别为1．73％、0．36％、1．04％、1．21％、0．58％。BCCL冰冻混合人血清酶校准品赋值结果的室间变异与赋值同期2011年RELA剔除等效限外测量结果的室间变异相近或比其略小。

3讨论

获得具有溯源性与互通性的酶校准品是实现酶标准化的关键。用经参考测量程序赋值的具有互通性的酶校准品可使不同测量程序酶学测定结果趋于一致，并使结果溯源至参考测量程序“J。目前国内基本不生产酶校准品，而国外酶校准品溯源性不一、互通性不明且价格昂贵，给临床实验室的溯源校准及应用带来困难。用经参考测量程序赋值的人血清作为二级参考物质是一种可能的解决方法。由此，BCCL采用IFCC参考测量程序赋值的冰冻混合人血清作为校准品，其互通性已有文献证实¨。

血清样品的合理赋值是获得酶校准品的关键步骤之一。就酶校准品的赋值，ISO18153(2003)明确规定酶学参考物质应通过正式的实验室间合作研究定值¨。关于定值的确定，RELA拟采用统计值，但要求实验室数大于5。BCCL采用6家实验室的统计均值作为定值。鉴于我国临床酶学参考测量室内变异在1％左右，兼顾同期中国实验室参加国际RELA的测量结果和国内参考方法实验室比对计划的测量结果的偏离情况，BCCL将±3．5％面作为等效限。赋值结果显示，6家实验室ALT、AST、GGT、CK、LDH5项酶的室问CV为0．36％～1．73％，接近或略小于同期RELA的室间CV。

酶校准品是酶催化活性正确量值的载体，通过校准可将该量值的溯源性传递到患者样品的结果，其应用前提是参考测量程序与相应的常规测量程序具有相同的分析特异性。据我国室间质评资料统计数据显示，目前我国绝大多数临床实验室用不加5．磷酸吡哆醛(PIJP)的氨基转移酶的常规方法，使IFCC参考测量程序赋值的酶校准品的应用受到了限制。ISO18153(2003)指出临床酶学参考方法需由有关国际组织约定，不应建立和应用国家或地区酶学参考方法。我国原卫生部已等同采用IFCC的参考测量程序，并已将其转化为我国卫生行业标准。因此，应推荐与提倡使用与参考钡0量程序具有相同的分析特异性的常规测量程序，这样才能实现溯源，IFCC参考测量程序赋值的酶校准品亦得以应用。