免疫荧光法测定hs—CRP在新生儿感染中的应用

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CRP(c反应蛋白)是急性感染和组织损伤时机体在应激状态下由肝脏合成的急性时相蛋白，是目前临床较常用的诊断细菌性感染的指标。由于新生儿(包括早产儿)的CRP基础水平往往很低，用一般的检测方法不能测出此微小的变化，因此应用一种高敏感性的测定方法就十分重要。现选用免疫荧光法和免疫浊度法作对比测定新生儿ll8一CRP来反映各自的灵敏度，以选择高敏感性的测定方法配合临床需要。

1资料和方法1．1资料

1．1．1临床资料选择

2007年在我院新生儿病区住院治疗出生一月内的新生儿共6o例(男38，女22)例，经诊断肺炎35例，早产儿10例，败血症8例，腹胀3例，腹泻2例，ABO溶血和脐炎各1例。

1．1．2标本采集和要求

采集新生儿在住院期间的指血或静脉血作样本。

1．2方法

1．2．1免疫荧光法原理是一种基于免疫荧光屏的测试技术。该检测是采用双抗体夹心法，将检测缓冲液和血液样本在检测瓶中进行混合，荧光标记缓冲液中的CRP抗体和血液中的CRP抗原结合形成抗原抗体复合物。当混合物样本被放在检测板的样本孔上后会迅速地扩散到硝化纤维基质的测试带上，该复合物被测试带上的CRP抗体所捕获。因此，血液标本中的CRP越多，测试带上的复合物积聚得越多。荧光抗体的信号反映了被捕获的CRP数量，经过i—CHROMAReMer免疫荧光分析仪的处理，能够反映出血液样本中CRP的浓度。ks—CRP(含常规CRP)。检测的灵敏度和范围分别是0．1ms／L和(0．5～2OO)ms／L。仪器测的数据<5mg／L为ks—CPR。免疫浊度法原理QuikReadCRP是一种用抗人CRP包被的微粒进行免疫比浊测定CRP的仪器。样本中的CRP和微粒进行反应，反应生成物改变了溶液的浊度，通过QmkRe~仪器进行测定。全血加到缓冲液中，血细胞被溶解。测定也用这同一比浊管进行。试剂已预先定标，每批特定的定标曲线参数已存入在磁卡中，每一盒试剂配一张磁卡。测定的范围和灵敏度分别是(1～160)mg／L和<1的形式表示)。

1．2．2测定的方法将同一样本先作免疫荧光法测定再行免疫浊度法测定。

1．2．3统计学处理将以上两种测定方法测得的数据进行统计分析，比较是否存在差异。

2结果

6o例新生儿l1s—CRP测定的结果中，使用免疫荧光法的结果高于免疫浊度法的结果的例数有58例，占96．6％，其中(1-3)mW'L范围内的35例病例中免疫浊度法仪器显示结果<1mL的比例占60．3％，仅有2例显示两种测定方法结果无差异。见表1。

3讨论

通过对比两种CRP的检测方法，免疫荧光法由于采用双抗体夹心法的免疫荧光标记技术，其最小检出量可达10。，灵敏度极高n]。因此，i—CHROMAks—CRP测试敏感性为0．1mL，检测范围(0．5—2O0)ms／。采用免疫浊度法的QuikReadCRP测定的范围是(1～160)mg／L，当<</span>lmeVL时仪器显示读数均以<1的形式表示。两者比较前者敏感性明显高于后者。

在健康人的血清中CRP浓度很低，当细菌感染引起炎症，损伤或手术后，由于其半衰期在(6～12)h，因此CRP的浓度会显著升高，是一种急性时相血清蛋白，同时也表明其浓度的增高比WBC的改变来得早，是早期诊断感染性疾病的一项重要指标。新生儿的血清和脐带血中CRP的浓度非常低。这可能归于肝细胞发育不成熟并且不能产生某些蛋白质。其特异性和非特异性免疫功能尚未建立完全，比正常人更易受到病原体的感染，产生免疫应答反应也较迟。因此，当新生儿或早产儿受到感染或严重感染后，体内CRP的浓度也不如健康人在感染后增高明显，通常未必能超出正常人8m~dL的参考值J，甚至极低，因此根据新生儿的免疫机制特点，即使CRP浓度一个小的升高，也可指示一种感染状态-3】，故不能以此作为诊断疾病的标准。那么，选择一种高敏感性的测定方法来检测这种情况下的Hserp(含常规cPa,)是早期诊断新生儿感染的关键。通过应用以上两种测定方法虽然都能测出<8mg／L的浓度，但由于免疫浊度法的敏感性不如免疫荧光法，显示其结果有96．7％的比例低于免疫荧光法，特别在(1～3)mg／L范围内对比，免疫浊度法的结果甚至全都<</span>1mL。Julie等对新生儿hs—CRP的测定显示参考范围为<1～2mg／L，超出此范围与严重感染有关。换句话说，如果应用免疫浊度法检测新生儿hs—CRP的话，会造成很大比例的假阴性结果出现，给临床造成漏诊或误诊。同时对于新生儿来说，由于CRP半衰期较短，当刺激因素有效清除后CRP即迅速下降，高敏感性的检测方法更显著表现出来，其下降是细菌感染开始被控制的最早标志，可以用来评估抗生素疗效和指导抗生素的疗程】。尤其在危及新生儿，特别是早产儿生命的败血症病例中，个别病例白细胞不升反降，选择测定h8一CRP作诊断依据尤为重要。假如此时h8一CRP浓度刚好略高于2mg／L～3mg／L的话，那么应用高敏感性测定方法就显得意义更为重大。

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