诊断常用仪器及检测方法1.自动化免疫浊度分析系统
免疫浊度分析属液相沉淀试验,抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应,形成小分子免疫复合物(<19S),在增浊剂(如PEG、NaF等)的作用下,迅速形成免疫复合物微粒(>19S),使反应液出现浊度,待测抗原量与反应溶液的浊度呈正相关。分为免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。
一、免疫透射比浊法
原理
可溶性抗原抗体反应后形成的免疫复合物,使介质浊度发生改变,光线通过抗原抗体反应后的溶液时,被其中的免疫复合物微粒吸收,在保持抗体过量的情况下,吸光度(A值)与免疫复合物量呈正相关。与已知浓度的抗原标准品相比较,可确定标本中抗原的含量。
二、免疫胶乳比浊法
免疫胶乳比浊法为一种带载体的免疫比浊法。在一般的透射比浊法中,少量小分子免疫复合物极难形成浊度,要形成较大的免疫复合物,参与反应的抗原、抗体量应较大,这显然不符合微量化的要求,为提高免疫浊度测定的灵敏度,发展了免疫胶乳比浊测定法。
三、免疫散射比浊法
悬浮微粒对光散射形成的散射光强度(Iθ)与微粒的分子量(M)、浓度(c)、入射光的波长(λ)和强度(I0)、测量角度(θ)、颗粒到检测器的距离(γ)等因素密切相关。
2.自动化发光免疫分析系统
自动化发光免疫分析仪主要由样本盘、试剂盘(盒)、温育反应系统、固相载体分离清洗系统、信号检测系统和计算机数据处理、控制系统组成。
一、吖啶酯标记化学发光免疫分析仪
利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术,以吖啶酯为化学发光剂,以细小的顺磁性微粒为固相载体。方法包括双抗体夹心法、双抗原夹心法和竞争结合法等。
二、酶联发光免疫分析仪
用参与催化某一化学发光或荧光反应的酶来标记抗原或抗体,在抗原抗体反应后,加入底物(发光剂),由酶催化和分解底物发光,通过光信号的强弱来进行被测物的定量。常用的标记酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP),常用的发光底物有鲁米诺、AMPPD和4-MUP等。HRP标记的化学发光免疫分析仪。
三、电化学发光免疫分析仪
采用电化学发光技术、生物素放大技术,以顺磁性微粒为固相载体,用三联吡啶钌标记抗原或抗体,三丙胺(TPA)为电子供体,而设计的一种自动化分析仪器。电化学发光稳定、持续时间长,易于控制
3.自动化荧光免疫分析系统
荧光免疫自动化分析主要是将抗原抗体结合反应与荧光物质发光分析和计算机技术有机结合的一项自动化免疫分析技术。荧光免疫自动化分析仪包括样本盘、试剂盘(盒)、条码识别系统、仪器控制系统、信号检测系统、数据处理系统,能自动进行加样、温育、洗涤、分离、荧光强度测定和报告打印等功能。根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离,分为均相和非均相两类。非均相荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定法;均相荧光免疫测定主要有荧光偏振免疫测定法。
一、时间分辨荧光免疫分析仪
时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是以镧系元素(Eu3+等)标记抗原或抗体作为示踪物,并与时间分辨测定技术相结合,建立起来的一种新型非放射性微量分析技术,具有灵敏度高,镧系元素发光稳定,荧光寿命长,不受样品自然荧光干扰,标准曲线范围宽等特点,已在临床实验室广泛应用。
二、荧光偏振免疫分析仪
荧光偏振免疫测定(FPIA)为一种均相荧光免疫测定方法,其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光(波长485nm)照射后,可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光(波长525nm),该荧光强度与荧光标志物质在溶液中旋转的速度与分子大小成反比,常采用抗原抗体竞争反应原理,适用于小分子半抗原(如药物浓度)的检测。
4. 自动化酶联免疫分析系统
酶联免疫吸附试验(ELISA)是现代临床免疫检验最基本、最常用的一项检测技术。能够测定传染病标志物、肿瘤标志物、骨代谢标志物和内分泌激素等许多项目,在疾病的诊断和疗效观察中起着重要的作用。但酶联免疫试验步骤多而复杂,反应时间长,工作人员反复手工操作,劳动强度大,感染机会多,影响了ELISA的发展,也成为实验室全面自动化的主要障碍。