今日实验分享：皮肤黑化模型 | 一份关于变美变白的研究

与光同辉

日常生活中，人体皮肤会在不同程度上暴露于阳光下， 因此阳光中的紫外线对皮肤造成不同程度的影响，紫外线是造成皮肤变黑、损伤及老化的主要原因之一。紫外线由UVA(400～315nm)、UVB(315~280nm)和UVC(280~100nm)组成，当皮肤受到UVA和UVB照射超过所能承受的剂量时，会产生急性皮炎，轻者可见红斑；重者可发生水肿或大疱，感觉瘙痒、灼热、疼痛。

紫外线中UVA能够透射至皮肤真皮层，作用于血管及其他组织，对皮肤的损伤作用具有累积性，同时紫外线可以激活酪氨酸酶，促进黑素生成，因此使用低剂量的紫外线照射皮肤可以诱导皮肤产生黑化。紫外线UVB对皮肤照射后，会引起皮肤发红，晒后几分钟到2～6h开始出现晒伤反应，16～24h达到高峰，3～5天逐渐消退，红斑慢慢变成暗红色，消退后皮肤脱屑并留下褐色的色素斑。

皮肤人工黑化模型由于其形成容易、受外界影响因素小，因而可用于美白祛斑化妆品或美白原料的美白功效评估。今天小助手分享常见的皮肤黑化模型的构建方法。
动物的选择
三色豚鼠，其皮肤的黑素小体和黑素细胞的分布与人类非常相似，试验结果重复性高，亦可建立美白功效评价动物模型并应用。

造模方法
选取成年健康的三色豚鼠，取棕色皮肤部位，去除被毛，经UVB紫外线照射，每天照射1次，每次1h，持续7d，未照射部位以斑试器覆盖。定时检测皮肤黑色素指数（MI）和红色素指数 (EI) ，停止照射7d后，处死动物取皮肤组织。

皮肤颜色测定

造模前、造模后使用检测仪检测EI和MI，基于单光谱反射和吸收的原理，获得皮肤EI和MI含量数据。

组织学染色

所取皮肤组织经10%多聚甲醛溶液固定，常规石蜡切片，分别进行组织化学染色。

图像分析

对染色后组织学切片进行显微拍照，采用分析软件对图像进行如下分析。

L-多巴染色的黑色颗粒进行分级，1级：基底细胞和棘层偶见黑素颗粒；2级：黑素颗粒分布以基底层为主，且分布不连续；3级：基底细胞和棘层均可见呈连续带状分布的黑素颗粒；4级：基底细胞和棘层可见大量呈连续带状分布的黑素颗粒，且角质细胞内可见较多黑素帽（附着于细胞核的黑素颗粒呈帽状）；5级：表皮全层密布黑素颗粒，可见较多黑素帽。

对氨银染色的组织切片进行光密度分析。光密度/黑色素细胞面积(L/M)：指黑素颗粒占黑色素细胞面积的百分率，表明黑色素细胞内黑素颗粒的含量。光密度/表皮细胞面积(L/K)：指黑素颗粒占表皮角质层细胞面积的百分率，表明黑素颗粒迁移到角质层的含量。光密度/表皮层面积(L/E)：指黑素颗粒占全部表皮层的面积的百分率，表明黑素颗粒在表皮中的含量。

造模结果
紫外线照射前后，肤色测定和多巴染色、氨银染色结果见表1。棕色皮肤经UVB照射后，MI显著升高，EI指数明显下降。组织化学染色显示黑素含量均明显增大，黑素颗粒染分级接近5级。L/M、L/K和 L/E的值照射前后相比均具有显著性差异。



总结
目前对于紫外线引起的皮肤颜色变化多聚焦在皮肤黑色素变化，但皮肤颜色实际为一个相对动态变化的过程，建立合适的动物模型研究其动态变化，势在必行。