徘徊着的 在路上的
你要走吗 Via Via
易碎的 骄傲着
那也曾是我的模样
沸腾着的 不安着的
你要去哪 Via Via
谜一样的 沉默着的
故事你真的在听吗
——朴树，韩寒
《齐鲁网》威海荣成寻山镇青渔滩村兔子石附近海边，星空下流动的海水发出蓝色荧光
今年对流式细胞仪而言，是个特殊的年份。笔者和《IVD从业者》一起办了个线上交流会。
根据会议的部分反馈，笔者整理和修改了ppt，发布于个人公众号，以飨同好。
1968年，第一台商品流式细胞仪ICP-11在欧洲大陆推出。是以，今年是流式细胞仪商品化55周年。
当时没有Facebook和微信，欧美之间交流不是那么顺畅，各说各话也不奇怪。
反正第一就是个念想，不是强大的必然理由。
1979年左右，北京师范大学引进了国内第一台流式细胞仪。其后，这个市场一直是进口品牌的天下。
2013年，苏州赛景公司XTG-1600上市并在Cyto大会上展出。同年，深圳迈瑞和杭州艾森都推出商品化流式仪，后者并于当年获得医疗器械注册证。所以，2013年对中国流式从业者来说具有里程碑的意义，由此到今，国产流式之路已经整整10年。
这三个公司的产品还奠定了流式细胞仪的四条新标准：固态激光，小体积，信号处理快（不少于20比特），采样速度快（不少于15000颗粒/秒）。这也成了其后上市产品的及格线。
今天的流式细胞仪按照检测方式，可以分为荧光流式，质谱流式和拉曼流式。还有一些应用于专门流域的产品，如：检测纳米颗粒的纳米流式，量化分析体内循环细胞的在体流式，以及野外水下作业检测水生生物，微生物快检的产品。- 全球首台高通量流式拉曼分选仪 星赛生物 FlowRACS
- 全球首台在体流式细胞仪 光域生物医学 IVFC-1000
- 全球首台纳米颗粒多参数定量表征流式仪 福流生物 nanoFCM
完整的解决方案还包括荧光抗体，以及染料等等。我们从这个角度再看看主要流式品牌的情况。
流式细胞，其必要条件就是让细胞流动起来。鞘液技术是目前的主流，除此之外有Guava的毛细管和Thermo Fisher的声波聚焦技术。
无需微球的绝对计数是流路系统改进的一个方向，无论从方便性还是经济性上而言，都有极大的意义。看起来好像不难，现实是计数微球还没有退出历史舞台，因此进样体积精确测定应有提升空间。
散射光反映颗粒物理性质。紫光侧向散射提高微小颗粒检测灵敏度，在不少机型中得以采用。近几年，拉曼散射检测在流式细胞仪中得以应用。不同物质有不同的拉曼散射光谱。要解决的问题是拉曼散射信号比较弱。
根据荧光信号采集方式，可以把荧光流式分为分光型和光谱型，有的还附加图像功能。
荧光分光流式是目前的主流，我们以目前灵敏度最高的CytoFlex为例看看发展趋势。
光谱流式以Sony推出第一代商品机来算，迄今也是十年。目前玩家主要有Sony， Cytek，Thermo Fisher，BD和谱康。
下图说明光谱流式的最大特点，红色框的几组荧光染料，最大激发波长几乎一样，荧光分光流式是不可能一起使用的，这样就大大扩宽了荧光染料的选择范围，同时分析参数自然增多了。
质谱流式方面，目前玩家有Standard Big Tools（就是Fluidigm），宸安，谱康，还有基于富鲁达仪器开发试剂的普罗亭等。发展趋势是更多检测物，更高灵敏度，更快分析速度以及自动上样。质谱流式首先是质谱，要把质谱这个活玩好，最早一代质谱流式的发明人也是来自于MDS Sciex质谱公司。其次，就是数据处理，解构后重建，挑战大也最有可能使之区别于其它流式。
同样举个例子说明质谱流式的特点，无干扰，灵敏度高，同时检测物有极大想象空间，标签技术使其可以同时检测不同样本。
这里说个小花絮，引文的47参数实际上是42参数。看来，多参数分析容易使人昏头。
言至于此，不管质谱分析还是光谱分析，以及传统的荧光分光流式选用更多激光更多通道，都是为了同时进行多参数分析。我们上个比较表。
这里的样本前处理以及后面的数据处理，没有写详细的内容。原因就是：都不好弄，需要流式高手，这是多参数普及的难点所在。
这里面更大的问题是，究竟有多少分析需要同时检测这么多参数？需求如果不明确，市场就是一个假市场。笔者认为应当是应用驱动技术和配套升级，“军备竞赛”反过来推动应用发展。当下，挖掘应用首当其冲。
在荧光流式机器里面，有的附加了图像功能。这个领域，玩家有Cytek（收购了Amins），BD，Thermo Fisher和UB。引入图像的好处是获得了细胞形态学和亚细胞定位等信息，反过来难点也是，叠加大量图像信息的统计也不那么简单。
微球流式荧光，笔者建议这一技术统称如此。三个词语可以跟其它技术明显区分：“微球”使之有别于传统流式检测细胞；“流式”是要让微球流动起来；“荧光”说明跟发光不是一个理。微球编码是这一技术比较好玩的地方，多参数同时分析也是这一技术最大的特点。
同样的问题是，究竟有多少分析需要多参数，自免和过敏原，其它需要吗？可以探讨。笔者自己一直在思考的问题是：
光声效应在流式界引起关注。最近光域生物医学推出的IVFC-1000即集合荧光分光，拉曼光谱和光声效应对血管中的肿瘤细胞进行检测。
《陈在不在》公众号上一篇文章《流式这三年》中列过一个表格，这里就不复制粘贴了，有兴趣的读者可以看上一篇文章，目前已经有15家公司30款型号。分选流式文章发表的标准格式，其结论不应该是速度，活性还有纯度之类。相反，应该是拿到细胞以后又得到了什么有价值的信息，在这个意义上，分选流式跟离心机目标是一样的。- 把分选仪器做得简单如分析流式，如CytoFlex SRT；
- 把分选跟单细胞多组学结合起来，现在的单细胞测序极少以分选流式为起点，除非在分选时就加了标签。这里的标签是区分不同单细胞的。
淋巴细胞分群目前六色才三家。精细分群尚在发展之中。
自身抗体应用微球流式荧光，已经毋庸置疑。这里举一个元德维康的抗血小板膜糖蛋白特异性抗体检测的例子。
临床仪器方面的进展要比试剂快得多。目前，有18家公司获得NMPA医疗器械注册证。还有10家左右公司生产微球流式荧光机器。
不过，别高兴太早。试剂依然是不配套。目前注册备案的染料最多是三激光十二通道。
也就是说，买了高配仪器，大概率不能合法干高配的活。
临床操作者最关心的还是易用性，流式只有像其它临床仪器一样易用，方能真正普及。十年前迈瑞的BriCyte E6，目前看来还是一个临床流式的标杆。
易用还包括了前处理的自动化，
四大类样本，非免洗测试是难点，不是说有离心机就不能实现自动化，但是需控制在较低成本，同时保证通量的前提下实现自动化才是目标。
微球流式荧光在自动化方面开了一个好头，胡曼，透景，唯公，帝迈，宜乐芯推出了一体机，透景还有微球流式荧光和发光的双子岛。
归根结底，临床最需要的还是一揽子解决方案，目前看旷博/必达科最为全面。
流式之路，注定跟所有推广型产品一样，平凡也就是不平凡。
第一，最理想的设计应当是能拓宽应用的边界，诊断以前诊断不了的疾病；
第二，在相同用途前提下，让用户感受到的性能提升，FAB，最重要的Benifit；
第三，跟随式创新最重要是稳定；
第四，没有使用和渠道的可及，难免归为空想；
第五，无论是否真的创新，价格是基础，不应该是特点，更不应该是唯一的优点。
回答部分会议中收到的问题。当然，与其说是回答，不如说是开一个脑筋风暴的窗口，欢迎有砖者拍砖，没有砖头的捡石头来拍，对脑门的冲击效果是一样的。Q: 流式细胞仪的中国市场与全球市场有哪些独特的特点？
A: 笔者觉得，原创性还是国外要强得多。咱们号称的原创多多少少都有国外产品的影子。比如市面上一个趋化因子试剂盒，其实就是把BD公司的一个CBA试剂盒去掉了IL-8。国内在落地上的勇气和步伐一般而言要快于国外。目前，我们要做的是用循证医学的思路把数据夯实。
Q: 流式细胞仪在中国的市场前景以及未来机遇如何？
A: 科研，临床，工业三个市场。科研就是求新，科学家要领先市场的供给，但注定是多人多面的，工业化产品要不要追随，我们不在这里讨论。临床方面，流式在多数人眼中是白细胞分型，是高大上，但如果能让免疫细胞分群更加普及，检验科操作如同其它检验设备，临床解读没有障碍，其实增长空间不可想象。工业上把住合成生物学，细胞治疗，CRO等机会，市场也不可小估。
补一句，踏实把应用做得更普及，把仪器做得更稳定要比“军备竞赛”更重要。
A: 说实话，笔者对这个问题一直不太关心，关心圈不等于影响圈。发光市场大，是不是就要人人做发光，还是要看能掌握多少，即可及市场。流式市场小，但透景要比多数IVD从业者成功。我们终其一生，也没法实现某些人的小目标，这就是现实。
不过，既然总有人问，还是估计一下，目前看大概10亿美金以内（题外话，NGS不算服务好像也是这个体量？），笔者认为目前应该是6亿，仪器和试剂在四六，或五五，这都不影响我们的判断了。
最后，感谢提供为本次讲座提供思路和资料的各位老师。
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