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纯技术贴:重组抗原能否代替血清原有标志物(天然抗原)?

2021-10-20 10:58| 编辑: 归去来兮| 查看: 3281| 评论: 0|来源: IVDdiagnosis | 作者:Biodogzhao

摘要: 很多做IVD的研发新手开始做研发的时候,都会面临一个问题——标准品。 标准品既可以是国际或者国家可以直接采购的标准品,也可以是赋值过的血清,很多人为了图省事,直接采用重组抗原配制。那么重组抗原是否可以替代 ...

很多做IVD的研发新手开始做研发的时候,都会面临一个问题——标准品。


   标准品既可以是国际或者国家可以直接采购的标准品,也可以是赋值过的血清,很多人为了图省事,直接采用重组抗原配制。那么重组抗原是否可以替代血清使用呢?其实,大多时候是不可以的。重组抗原毕竟是重组的,它的分子大小、蛋白折叠、位点丰度等等其实是和血清中实际的标志物状态有很大差别的。很多新手在搞研发的初期,都习惯用重组抗原代替血清,等真正试剂走向临床并投诉很多的时候,你再用真实样本去复合,会发现,检验科大夫并没有冤枉你。


   为什么呢?其实很简单。上面提到了,重组抗原虽然和血清标志物有某几个相同的位点,但是在分子大小、蛋白折叠、位点丰度等方面还是有很大不同的,所以我们用重组抗原做标准曲线去给血清标志物去定值,显示是不成立的。我们举个例子,我们用血清标志物和重组抗原分别梯度稀释作为x,发光值为y,做两条线,假如两者都是最简单的直线,血清(y=kx+b);抗原(y=mx+n);你会发现,这两条直线的走势和截距大概率是不一样的。我图片中还通过数学的方式验证了,只有当两者的截距相同的时候,才可以达到同比例的增减,这时两者才可以完全做到相互代替,但是这种情况是随机的,很难保证b=n,不过可以通过调整b和n的相近程度,来达到替代。总的来说,如果两者都是直线,且血清和抗原的阴性背景值接近,还是可以达到近似替代的。


   但实际做试剂的时候,大多数企业采用的都是双log拟合或者四参数拟合,因为高值线性做不上去。我们图片中通过双log举例,证实只有当b=n,log(x1)/log(x2)=x1/x2时,才可以保证同比例增减,抗原可以替代血清。显然,条件很难成立了。不过,理论上,在低值区间,血清和抗原替代的话,偏差相对较小,偏差会随浓度值的增加而逐步增大。因为,低值区间,两者都还是直线。



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