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这是一个好问题。
要回答这个问题,首先需要谈一谈纸层析的原理。当我们进行薄板层析(TLC)时,利用的是流动相和固定相对化合物的竞争结合差异。对固定相的附著力较强而对流动相的溶解度较低的化合物,就会因移动缓慢而被落在后面;反之,对固定相的附著力较弱而对流动相的溶解度较高的化合物,就会因移动迅速而跑在前面。
具体到分离叶绿素的纸层析,固定相是滤纸(纸纤维),而流动相通常是各种有机溶剂的混合物(层析液为石油醚:丙酮:苯=20:2:1),需要分开的化合物自然是叶绿素混合物。当层析液带著叶绿素混合物在滤纸上扩散移动时,叶绿素b最易附着在滤纸上而不易溶于层析液,因而在最下面;相反的情况是胡萝卜素,它跑在最前面。
这里就会出现一个问题了。当固定相一致的情况下(始终是一样的纸纤维),化合物的真实分离效果其实取决于流动相。如果你改变石油醚、苯和丙酮的比例,跑出来的纸层析结果也会不一样(你可以试试)。而边缘效应本质上就是一种流动相不均匀。当层析液在滤纸上扩散时,极性较弱、沸点较低的溶剂会在滤纸两边沿处较易挥发,从而改变层析液中有机溶剂的比例。有机溶剂比例发生变化,导致叶绿素的迁移速度发生变化,因此产生了边缘效应。
那么,剪角能不能消除边缘效应呢?在实践中我们知道,叶绿素分离实验中边缘效应会造成叶绿素条带弯曲,适当的剪角可以纠正这一现象。但是,往深里想一想,似乎有点奇怪。如果剪角的原理是通过增加两侧层析液流过的距离而纠正条带弯曲,那么剪角的角度和长度会对结果有很大的影响,不是吗?那么,为什么不规定好剪角的具体操作呢(比如,45度角,剪0.5厘米)?另一个问题就是你的疑问。既然边缘效应一直存在,那么滤纸那么长,后面的边缘效应怎么办?
所以,这里真正起到纠正边缘效应的其实是面积。剪角后,滤纸接触层析液的面积较小,对层析液的吸附作用减慢了。这样一来,一是留下更多的时间供流动相在滤纸中达到分布均匀。二是,层析液的各种成分在密闭试管内会达到气相饱和,抑制挥发,而减慢的吸附作用能够为达到气相饱和留出足够的时间。
以上。 |
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