在试剂开发过程中，需要对原料进行预处理（透析或脱盐），这时了解原料的等电点非常重要，可以避免由于pH值不对导至的原料聚沉。在对原料进行标记（生物素标记、吖啶酯标记或碱性磷酸酶标记）的时候，知道原料ε-氨基（赖氨酸Lys残基的侧链）的数量有助于初步确定标记比例。现推荐一个网站可以输出蛋白质理论等电点、赖氨酸Lys残基数量、消光系数、不稳定系数以及脂肪族系数等。 1、推荐网站：https://web.expasy.org/protparam/
2、输入蛋白质序列 2.1 如何获得蛋白质序列：原料COA上查询、NCBI查询 2.2 以Chain B，Streptavidin举例
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分子量约为13Kd，理论等电点为6.04。
消光系数也称摩尔吸光系数(Molar Extinction Coefficient)，是指浓度为1摩尔/升时的吸光系数。依据朗伯比尔定律，A=Kbc，其中A为吸光度，K为摩尔消光系数，b为吸收介质的厚度，单位为cm；c为吸光物质的浓度，单位为mol/L）。当吸收介质的厚度（比色皿）为1cm时，我们通过紫外分光光度计测量出吸光度Abs，然后除以摩尔消光系数K，则可以计算出蛋白质浓度。 Chain B，Streptavidin的摩尔消光系数为3.146（0.1%，1g/L）。 蛋白质的不稳定系数是衡量蛋白质稳定性的重要参数之一。它指的是在一定条件下，蛋白质发生变性的浓度或温度。蛋白不稳定指数可以通过实验手段测定，常用的方法有圆二色谱、荧光光谱、差示扫描量热法等。通过测定蛋白不稳定指数，可以评估蛋白质的稳定性，为药物设计、酶工程等领域提供重要参考。不稳定系数越小，表明蛋白越稳定。蛋白质不稳定系数不稳定系数40以下，提示稳定性好，大于40提示蛋白质可能不稳定。 Chain B，Streptavidin的不稳定系数为5.26，表明蛋白质理论上较稳定。 脂肪系数是一种用于评估蛋白质稳定性的指标，其原理基于蛋白质折叠过程中的主要驱动力-疏水相互作用。该系数通过计算丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸这四种疏水氨基酸在蛋白质中的出现频率，并乘以各自的权重后加和得出。脂肪系数越高，表明蛋白质的稳定性相对越强。 Chain B，Streptavidin的脂肪系数为60.87。 |
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