发光使用的发光剂也是各有千秋！

吖啶酯(AE) 为三环有机化合物，易氧化。在碱性条件下被 H2O2 氧化时, 发出波长为470nm的光， 具有很高的发光效率。其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。用于半抗原和蛋白质或多抗或单抗的标记。

其为人工合成物质，自然界不存在，故无背景噪音干扰; 吖啶酯对pH，温度的变化相对不敏感。同时它的分子量仅为481,空间阻碍效应小，氧化反应不需催化剂，只要碱性环境中就可以进行。

发光反应迅速，本底低。在氧化反应过程中，结合物被分解，因此游离的吖啶酯的发光不受抑制，试剂稳定性好。是目前行业内较为优秀的一种发光剂的选择。

三联吡啶钌 [RU(bpy) 3]2+ 是电化学发光剂，它和电子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。直接标记抗原或抗体。

发光特点是只需0.01ms就可发出稳定的光，并在300 ms达到最高峰，每秒几十万次的循环电化学发光大大提高了分析的灵敏度。

标记稳定，容易控制，但电场作用需特殊的测量池，每次测量完需40-60秒时间清洗测量池让电极回复状态，易引起交叉污染，影响结果准确性，同时降低分析速度。

所以该方法的使用存在较高的技术壁垒，国内外该技术最成熟的还属罗氏诊断，同时因为其专利保护，该方法目前在国内并不普及，深圳普门生物目前走在国内前列。

鲁米诺（3-氨基苯二酰肼） 、异鲁米诺（4-氨基苯二酰肼) 及其衍生物都有化学发光特性。

中性溶液中：通常以偶极离子（两性离子）存在。

在碱性溶液中：则变成二价负离子，可被氧分子氧化成一种能产生化学发光现象的中间体。

在氧化剂中：鲁米诺被转换为激发态，激发态衰变为基态并发出荧光。

发光率检测：最适荧光波长为425nm（在60 mM K2S2O8，100 mM K2CO3，pH11.5溶液中检测化学发光率）

3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐（AMPPD，俗称金刚烷）。金刚烷的结构主要由产生光信号的苯环-金刚烷和维持结构稳定的磷酸根两部分组成。

在一般情况下，金刚烷结构很稳定，但是在遇到碱性磷酸酶时，碱性磷酸酶会催化金刚烷脱去磷酸根基团，形成一个不稳定的中间体，这个中间体将自动分解并产生470nm光信号，可以持续几十分钟至数小时。

感光微粒：是覆盖有亲和素和酞菁染料的乳胶聚苯乙烯微粒， 可以吸收680nm的光， 生成高能单线态氧。

生物素化抗体：特异的抗体与生物素结合后， 形成生物素化抗体， 可以与含有亲和素的感光微粒结合。

发光微粒：发光微粒含有烯烃染料和特异性抗体（抗原）可以与单线态氧反应，放出612nm光信号。复合物释放的化学光在612nm被LOCI测器读取。只有两种粒子形成二聚体才能生成化学光信号。

检验原理如下：

特点

反应时间短： 均相反应的模式。

高灵敏度： 反应过程逐级放大， 发光迅速提高了灵敏度。

稳定性好： 整个能量（光） 的产生、 传递和放大过程十分稳定， 不易受到pH值、 离子强度和温度的影响；

目标分子的多样性： 可实现对多种生物分子的测定，如蛋白质、多肽、酶活性、DNA、 RNA等。