化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA) 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。 该技术主要分为免疫反应和化学发光系统两个方面。免疫反应主要指抗原和抗体结合;而为了能让这种结合定量的被检测出来,从而引入了化学发光系统:将化学发光物质标记在抗原(抗体)上,或用酶作用于化学发光底物。在催化和氧化作用下,化学发光物质被激发从基态达到激发态,而该种状态并不稳定,发光物质会重新回到基态,同时释放光子。由于光信号的强弱与待测物浓度在一定范围内呈线性关系,因此在光学检测系统的帮助下,可以对光信号进行定量检测,从而确定待测物含量。 按其标记物的不同,化学发光可以分为直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。三种方法各有特点,均为目前主流的化学发光方法。 根据抗原或抗体的包被方法不同,化学发光分为微孔板式和微粒式,微粒式又分为磁微粒式和非磁微粒式。由于磁微粒较大的比表面积,能够对抗原或抗体进行更充分的包被,提高检测灵敏度;在外加磁场作用下,可以全自动化清洗未结合的物质从而大幅提高检测效率,因此磁微粒化学发光技术成为主流免疫诊断技术,也成为国内化学发光厂商研发的重点方向。 与其他免疫诊断的方法比,化学发光具有以下几个优点: 1.高灵敏度: 灵敏度可达 10^-16 mol/L,可检出酶联免疫分析无法检出的物质,对早期诊断有重要意义。 2.较宽的线性动力学范围: 发光强度在 4-6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系,这与酶免分析吸光度(OD值)2 个量级的范围相比,优势明显。 3.精确的定量检测: 光信号强度和待测物质浓度呈线性关系,根据仪器的标准曲线,精确算出待测物浓度。酶联免疫通过灰度分析,通常结果只用来做定性或半定量分析,或精度要求不太高的检测。 4.结果稳定,误差小: 化学发光技术样本本身发光,不需要额外光源,避免了外来因素的干扰(光源稳定性、光散射、光波选择器),分析结果稳定可靠。 5.操作简便: 光信号持续时间长,绝大多数分析测定仅需加入一种试剂,简化了实验操作。 所以在免疫诊断中,化学发光已成为了主流技术。 |