焦磷酸测序成本其实挺高的，但我们也是没办法，试剂我们也是买的，而且我们也会补测，不是一次性就能全部成功的，所以也并不是100份试剂就能出100个结果的，再看看下面的情况，就知道为什么会贵了。。 一、为什么选这些试剂？ 1-亚硫酸盐转化，我们买的是大包装59104，也可以问问qiagen小包装货号。（照着说明书操作就行）。这个回收率特别高，降解也不严重，而且转化后的样本保存时间1年。（下面这个图是两年前的，价格已经涨了两轮了）。
2-kapa的，货号K5525，我们扩增用的酶（感觉挺万能的，高GC，高AT都能扩增）。这个效果比qiagen的还好（所以扩增我们不用qiagen）），我们扩增体系是50ul。
3-测序试剂（Q96与Q48） 没得选，就qiagen这一家，没有其他品牌，所以只能看着涨价而无能为力。
二、风险评估 1-引物评估就是引物分数在70分以下是高风险，70-75是中风险，75分以上是低风险。不是每个位置都有合适的引物，引物上不建议含CG位点，也并不是技术不好就设计不出引物，没有引物的位置，谁也没法设计。比如遇到TTTTTTT这种，就算设计成引物了，那人家引物公司也不建议合成。 2-实验可能存在切胶、巢式的情况，需要收取试剂耗材成本费，倒贴人工，我们是巴不得一次性成功，千万别觉得我们故意要收这个钱，
3-我们都会提前告知客户风险，客户能接受，我们就做。毕竟焦磷酸测序也有局限性的（不是啥位点都能做，得看序列的） 三、文献 有客户经常问我们发表了哪些文章，其实这些跟公司无关的，发文章那是客户自己的本事，我们只是收钱做实验。文章的分数主要还是看整体思路、写作水平，还有一点点运气成分。 如果实在需要，顺手找了几篇熟人发表的文章。（前面的几篇里面也有一些这几年的文献） PolarBodyGenomeTransferforPreventingtheTransmissionofInheritedMitochondrialDiseases LINE-1 hypomethylation in normal colon mucosa is associated with poor survival in Chinese patients with sporadic colon cancer Longtermambientfineparticulatematterand DNAmethylationininflammationpathways:resultsfromtheSisterStudy |
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