技术篇（中）：胶体金常见问题分享——沉淀和金水分离

一、 胶体金常见问题分享——沉淀

 很多同学在用胶体金标记抗体的时候，可能一次性用不完，就会4℃放一晚上甚至更长时间，等再用的时候就会发现，胶体金竟然大部分都沉淀下来了。这时候你就会纠结了，这是死金了吗？还能用吗？为什么我标记的时候感觉挺好的呀，没感觉有沉淀的迹象啊。

为什么放一晚上就沉淀了呢？我曾经也遇到过这样的问题，尤其是大批量生产的时候，这个现象可能你会察觉的更明显。我们来分析一下。水中的颗粒之所以会沉淀，那肯定是粒径变得很大，密度大于水以后才会发生。为什么粒径变大了呢？肯定跟你的整个标记或者保存过程有关系，因为胶体金本身是不会沉淀的。我们来从头分析一下容易让胶体金聚沉的不利因素。

1.抗体的加入不当。

对于胶体金来说，抗体的加入本来是可以增加它的稳定性的，但是不当的加入反而会加速它的聚沉。抗体的加入不当，无非也就是抗体标记pH不合适，或者蛋白的加入量不足。我们在用胶体金标记抗体的时候，如果pH偏低或者卡在临界值附近，抗体整体带正电，胶体金带负电，网状交联就悄悄地产生了，可能开始不明显，但这是可以慢慢累积的一个非常不利的因素；还有就是蛋白标记量不足，狼多肉少的竞争关系，必然会使得颗粒与抗体的共用，也是可以产生交联的。很多同学说，我事先都摸索好了小样的最佳标记条件了，到了大样就又不行了，其实这正是问题的所在。过度细致地摸索标记的最佳临界值，不预留空间，放大生产会出现很大的问题。

2.封闭剂不合适。

有些颗粒变大的过程是可以出现在封闭这个环节的。常用的封闭剂就是BSA，我不知道大家对BSA有没有一个认知，就是不同厂家的BSA有时候做出来的结果可能是天差地别。每个厂家可能是由于纯化工艺有区别，里面的盐离子，杂蛋白含量均有差异，所以实验结果有差异。我们不能说贵的就好，便宜的就差，反正封闭环节所用的BSA也是必须要针对性考察的一个因素。

3.标记物保存液。

这个算是直接影响标记产物的一个因素了吧。考察它，无非就是考察它的理化环境和成分。首先，pH是首先要考察的最重要的因素。其实不管是标记过程还是标记产物，它们基本上都是喜碱不喜酸，归根到底还是抗体本身的带电情况决定的。然后就要考虑里面的其他成本，比如这里又出现了BSA，或者是蔗糖，我们可以逐一排除。

说到这里，有的同学想问，我怎么知道究竟是哪个因素引发的我的颗粒变大的呢？其实您可以并行做实验验证一下，看看哪个因素影响最大。比如取3支管做平行实验，一个仅仅加入抗体后为止；一个做到封闭完成为止；一个完成整个过程为止；3支管同时4℃过夜，看看沉淀出现在哪个环节。

最后插一句，离心条件对聚沉有影响吗？大家可以思考一下。

二、胶体金常见问题分享——金水分离

 什么是金水分离呢？就是我们上样的时候，样本的爬行速度要快于金爬行的速度，我们可以明显看到他们俩走的不同步。

一般这种问题仅仅会出现在刚接触本行业的小白，或者是客户在使用的过程中。为什么这么说呢？那就要从它的原因来说。为什么金子的爬行速度要慢于血清，一个原因是由于结合垫处理不当，导至胶体金释放的很慢很慢，而且残留非常严重，你会发现即使过去很长时间依旧存在膜面泛红的状态。这种情况就是针对于小白来说的，可能在喷金之前。并没有对结合垫进行处理，或者处理的很简单，或者是金复溶液的配方也是有点问题的，所以导至金子与结合垫结合的过分牢固。如果小白对于这种情况短时间做不出很好的处理，可以使用Alstrom6613.6614.6615这种疏水性相对强一些的结合垫，用之前稍微处理一下释放的就不会很差。另一种原因就是你上样的时候死金了。这种情况对于含样品提取液或者是样本裂解液的比较多，比如食品中黄曲霉毒素的测试，很多时候提取液中的成分可能会导至死金。

还有就是客户测试的时候，尤其是处于南方阴雨连绵的夏天，客户拆袋后不及时使用，结合垫里面的糖分一旦受潮，再想释放，就是特别困难了。另外生产厂家在这里也要注意，如果您生产车间的除湿功能不好，那就尽量不要在雨天或者甚至夏天去生产，可以把生产任务多集中在秋冬季节。夏天生产的条子出问题的概率是很高的。