IVD技术篇(上):胶体金常见问题分享——中空和堵膜
2022-9-3 11:14|
编辑: 小桔灯网|
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摘要: 为什么液体会绕着包被原料走呢?那肯定是液体流经这个地方的时候被堵住了。是什么原因导至的“堵”呢?我们来思考一个小常识:比如你吃饭的时候不小心把一个残渣落在了茶几上,几天没擦,干在上面了。你用湿抹布去擦 ...
为什么液体会绕着包被原料走呢?那肯定是液体流经这个地方的时候被堵住了。是什么原因导至的“堵”呢?我们来思考一个小常识:比如你吃饭的时候不小心把一个残渣落在了茶几上,几天没擦,干在上面了。你用湿抹布去擦,发现残渣硬邦邦的根本擦不掉,而且主要是,它不吸水!只有吸水了它才容易被擦掉,所以怎么让它快速吸水呢?假如你的食物残渣是含有蜂蜜或者是淀粉之类的,泡一会就相对容易擦掉;假如食物残渣是肉制品或者含油脂较多的,你还得往抹布上放点洗洁精。好了,我们再回来分析一下我们的试纸条中空问题。蛋白包被在NC膜上,如果它本身的吸湿性很差,那么血清自然会绕着它走。怎么能够让它吸湿性增强呢?可以考虑加糖!糖有很强的吸湿性,如果我们在包被缓冲液里加点糖,那蛋白吸水的能力会大大增强,与血清接触的时候不至于会绕着走,可以快速地渗透;还可以考虑加醇!醇的加入也可以部分提升蛋白的亲水性的,这是很多前辈给我们留下来的宝贵经验。那加洗洁精可以吗?可以加,但不是加在NC膜上,NC膜对于表面活性剂是十分敏感的,如果你感兴趣的话,往包被缓冲液里面加点吐温或者甘油试一下,可能线条宽度会让你怀疑人生。 我们可以将表活加在样品垫处理液,或者是样品稀释液,它们可以降低血清的表面张力,使其与蛋白的浸润性变强。但是表活的加入很多时候会引入假阳,而且这个假阳很有特色,就是中空一样的假阳,只有T线的上下边缘会出现红色印迹。这种情况我也不太好解释具体的原因,只是我了解的是,一般假阳都是基于静电吸附或者是疏水作用这种非共价键产生的,如果我们能加入某种成分改善抗体的带电情况或极性,这种情况应该就可以解决。比如加入微量的SDS或者酪蛋白,引入大量的负电荷;或者是加入BSA、OVA这种杂蛋白,起一个流动封闭的作用,可能假阳的情况会有所改善。还有一个因素,与包被抗体引入的疏水和假阳可能都有关系,那就是盐离子浓度,尤其是以氯化钠为代表的盐离子浓度。盐离子浓度过高,烘干的时候nc膜表面会形成结晶,也会导至其瞬时浸润性变差;而且貌似盐离子浓度高的话,表活的加入引发假阳的概率会更高,当然这不是绝对的,也有相反的时候。不太好解释原因,大家可以根据自己的经验来调试和观察。总而言之,改善中空的中心思想就是改善浸润性,中间若产生其他问题可以再逐一分析和解决,总会达到你的预期。
二、胶体金常见问题分享——堵膜
有些人在做胶体金上样检测的时候,可能会遇到如下的问题:我上阴性样本胶体金释放的很好,背景也非常干净;上阳性样本的时候,发现胶体金全部堵在了结合垫和NC膜的贴合处,而且这种堵膜并不是死金产生的,因为堵住的胶体金依然是鲜红的颜色。这是为什么呢?我列一张图: 为什么阴性样本没事,阳性样本就堵膜了呢?首先,我们分析一下,堵的直接原因,那肯定是颗粒变大了,NC膜的那点孔径,它根本钻不过去了。为什么阳性样本会导至胶体金颗粒变大了呢?它的微观世界是怎么样的呢?该怎么解决呢? 最近做新冠检测的同学可能遇到过这种问题,尤其你的双抗夹心抗体对针对的是膜蛋白的,其实很多做微生物检测的同学都遇到过这种问题。答案就是:你的检测对象对于你的抗体而言是多价的。当我们的检测物含有重复序列的时候,它所表达的蛋白就会有很多个相同的位点,如果你用的抗体针对的位点正好是这个,那直接导至的结果就是交联。我画个图帮助大家理解一下: 如图中所示,如果你的抗原被标记抗体结合以后,还留有相同的位点供其他的标记抗体结合,那结果就像织毛衣一样,很快就成网状结构了,堵膜那不是分分钟的事嘛。好了,道理说清了之后,我们该说说怎么解决这个问题。有一些同学想通过裂解蛋白的方式进行解决。因为病毒或者细菌的检测本身就伴随着蛋白的裂解,他们所以他们想找到一种温和的裂解液,使得蛋白裂解成更小的片段,让相同的位点分裂开来,蛋白的价数降低,又不影响抗原抗体的结合。这样实施的结果如何呢?我也不太好说,因为我也没试过,怎么说呢,反正也算是解决问题的一种思路,但是我总感觉这种裂解液应该挺难找的,或者说能达到预期目的概率应该不大。在这里呢,我给大家谈一下我的思路,因为我没具体实施过,所以只能算是给大家一个参考。我们可以想一下,蛋白交联的形成因素。如果两个物质含量相当,那交联肯定是很容易的,那如果其中某一种物质相对于另一种物质含量较低呢?那交联是不是就不是那么容易了。所以,如果我们把胶体金标记物的喷金量大幅度提高,检测物又相对稀释,是不是就会好一些呢?大家可以揣摩一下。另外还有一种思路。胶体金交联是由于每个胶体金分子上都标记了很多个抗体,如果每个金颗粒质只标记上一个抗体分子呢?我给大家再画个图,帮助大家理解一下: 那么胶体金是不是仅仅是颗粒变大了一丢丢,而不至于成网呢? 信息来源:IVDdiagnosis,作者:IVDdiagnosis |
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