分子技术丨Sanger检测技术介绍

2021-10-28 14:59| 编辑: 归去来兮| 查看: 5491| 评论: 0|来源: 基因talks

摘要: 前言基因的变异类型有多种（点击查看），对应的分子检测方法亦有多种，当前资本市场驱动着分子检测市场，并极力追捧NGS技术，因为其通量高，灵敏度高且性价比高。小编承认NGS是分子检测的必然发展趋势，但是短时间 ...

前言

基因的变异类型有多种（点击查看），对应的分子检测方法亦有多种，当前资本市场驱动着分子检测市场，并极力追捧NGS技术，因为其通量高，灵敏度高且性价比高。小编承认NGS是分子检测的必然发展趋势，但是短时间内，NGS并不会取代其他分子检测方法，因为针对不同的需求，都有对应的理想检测方法，每个检测平台都有着自己的优势，比如：

操作简单：PCR，ARMS-PCR，HRM等

时间快速：ARMS-PCR，HRM等

成本低：PCR，PCR-RFLP，MassARRAY等

准确：Sanger等

通量高：NGS等

灵活性：Pyrosequencing等

结果分析简单：ARMS-PCR等

自动化：核酸提取等

......

小编一直认为：没有最好的技术，只有最合适的技术！最好的，不一定是最合适的；最合适的，才是真正最好的。

2015年，随着精准医学计划的提出，国内涌现出大批优秀的创业公司，基因测序作为精准医学的核心技术，其地位不言而喻。Sanger测序是目前所有基因检测的国际金标准，是包括荧光定量PCR法、普通PCR法、芯片法、二代测序法、质谱法等方法的金标准。

今天，我们聊一聊分子检测的测序技术，在临床需求的推动下，基因测序技术发展快速，目前，基因测序技术已经快速发展到第四代，并且随着技术的飞速发展，测序通量显著提高，测序周期快速下降。

1953年，Watson和Crick推导出DNA双螺旋结构；1977年，Sanger发明双脱氧测序法；1986年，第一台自动测序仪出现。

我们先了解Sanger技术，什么是Sanger测序？

Sanger 测序（Sanger sequencing）：1977年，英国人Frederick Sanger发现在DNA复制过程中掺入ddNTP，会产生一系列末端终止DNA链，能通过电泳按长度分辨。由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。我们现在常说的一代测序技术，也被称为Sanger测序。

Sanger测序原理

1，用DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，直到掺入一种链终止核苷酸为止。

2，每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。

3，由于ddNTP缺乏延伸所需要的3‘-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。

4，它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段进行检测。

如今，随着毛细管电泳和相应的液体操作平台的开发，Sanger测序进入了高度自动化阶段，一个杰出的96孔毛细管仪一天之内就能测出约50万个核苷酸（0.5M）组成的DNA序列。

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