血涂片制备及染色

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血图片的制备   

       血图片染色显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本方法，主要用于红细胞、白细胞、血小板形态等检查，还可以用于白细胞、血小板的数量评估。在临床应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。如果血图片制备不良，染色不佳，常使血细胞的形态学鉴别和诊断发生困难，甚至导至错误的结论。如果血膜过厚则使细胞重叠缩小，血膜太薄易导至细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘。因此，制备厚薄适宜、头体尾分明、染色良好的血涂片，是血细胞形态学检查最基本的要求，必须以认真负责的态度注意操作过程中的每一个环节。

     1.载玻片的清洁   新购置的载玻片常带有游离碱质，必须用浓度约1mol/L HCL 浸泡24小时后，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。用过的载玻片可放入适量肥皂或其他洗涤剂的清水中煮沸20分钟，趁热将血膜刷洗干净，再用清水反复冲洗，必要时用蒸馏水最后浸洗后干燥备用。使用载玻片时，切勿用手触及拨片表面，以保持玻片清洁诶、干燥、中性、无油渍。

      2.血图片制备   血图片的制备方法很多，有手工推片法、载玻片压拉法及棕黄层涂片法等。血液涂片既可直接用非抗凝的静脉血或毛细血管血，也可以用经EDTA抗凝的血液制备。由于EDTA能阻止血小板聚集，显微镜下观察血小板形态时长采用，但EDTA抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集，因此最好使用非抗凝血制备血涂片。一张好的血涂片，要求厚薄适宜、头体尾分明、边缘整齐、两侧应留有空隙。

     临床上用的普通手工推片法是取血标本一滴置载玻片的一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿方向接触血液，使血液沿推片散开，通常推片与载玻片保持30度~45度夹角，平稳地向前推动，血液即在载玻片上形成薄层血膜。图片侯宝与血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容有关。

一般认为：血滴大、角度大、速度快则血膜越厚；反之则血膜越薄。血膜分布不均主要是推片边缘不齐、用力不匀和载玻片不清洁所致。血细胞比容高于正常时，血液粘度较高，保持较小的角度，可得满意结果；相反，血细胞比容低于正常时，血液较稀薄，则用较大角度。

                  血细胞常用的染色方法

血涂片染色是为了使血细胞着色，燃料将细胞的胞膜、胞质、胞核等染成不同的颜色，便于在显微镜下观察识别，根据细胞体积大小、染色深浅、颗粒的大小和颜色等特点对细胞进行判断。常用的染色方法：瑞士染色法、吉姆萨染色法和瑞士-吉姆萨复合染色法。

瑞士染色法：

瑞氏染料：由酸性染料伊红（E－）和碱性染料亚甲蓝（M＋）组成。将适量伊红、美蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料。甲醇的作用：一是溶解美蓝和伊红；二是固定细胞形态。
染色原理：

    既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。如血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质。
　　中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质；原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁含较多酸性物质，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。

吉姆萨染色法：

染色原理与瑞士染色法大致相同。吉姆萨染料由天青和伊红组成。本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差。

瑞士-吉姆萨符合染色法：

为兼顾瑞士染液的两者之长，将瑞士染粉和吉氏染粉混合，用甲醇溶解即瑞-吉液，用瑞-吉液进行染色，使血细胞的颗粒及细胞核均能获得满意的染色效果。