你想知道的关于T-SPOT的1,2,3

检验医师

相信在临床工作的各位医生，对“T-SPOT”这个名称都不陌生，或者至少有所耳闻。随着T-SPOT技术的推广和在临床工作中的逐渐普及，很多医生已经掌握了T-SPOT检查的指征。然而，不同种类的标本如何留取和送检，以及如何解读报告，依然是让很多临床工作者感到棘手的问题。那今天就让我们来一起了解一下如何在临床工作中更加游刃有余地面对T-SPOT的一些小贴士！



Q1
“T-SPOT”是什么？
“T-SPOT”实际上是检测试剂盒T-SPOT.TB®的简称。T-SPOT.TB是γ干扰素释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）的一种，是利用结核特异抗原（ESAT-6，CFP 10），通过酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunospot ，ELISPOT）检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断受试者是否感染结核分枝杆菌（现症感染）的新方法。因此，T代表效应T细胞，SPOT即斑点，TB代表结核。

Q2
这位患者需要查T-SPOT.TB吗？
临床工作中遇到的主诉、临床表现、个人病史各不相同的患者，为什么有些患者需要进行T-SPOT.TB检测，有些患者不需要接受T-SPOT.TB检测？T-SPOT.TB检测的适应证到底是哪些呢？
T-SPOT.TB的适应证主要包括结核分枝杆菌潜伏感染（latent tuberculosis infection, LTBI）的诊断和活动性结核病的辅助诊断。

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在活动性结核病辅助诊断中的应用：
a. 缺少细菌学诊断依据（如痰菌阴性）的活动性结核病的患者，可起到补充或辅助诊断的作用
b. 出现腹水或胸水的患者，可采用体液或组织标本来补充或辅助诊断结核性胸膜炎或结核性腹膜炎
c.辅助诊断儿童结核病
！T-SPOT.TB并不能作为诊断活动性结核病的金标准

2
在LBTI诊断中的应用：
a. 活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断
b. 排查儿童结核分枝杆菌（M.tuberculosis，MTB）感染
c. 对HIV感染人群进行LTBI筛查
d. 需要接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂等免疫抑制治疗，或需要接受化疗，或器官移植的患者排查LTBI

Q3
怎么留取送检标本？
知道了哪些患者需要检测T-SPOT.TB后，就要留取患者血液或体液标本送检了。
外周血、体液或浆膜腔积液都是可以送检的标本种类，临床医生可根据患者的实际情况考虑送检的标本种类。
①外周血送检须知
a. 采集外周血无需空腹，需用肝素/肝素锂/肝素钠抗凝（推荐绿帽管），不得用EDTA抗凝；
b. 采血量要求：2岁以下儿童2-3ml，其他患者4-6ml，免疫低下/受抑制者6-8ml；
c. 样本室温（15-25℃）运输与保存，不得冷冻/冷藏；
d. 样本采集后6小时内送到实验室，以便完成检测；
e. 一周内有输血史或做过PET-CT的患者，会影响血液中淋巴细胞的分类，建议两周后再行检测；
f. 运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果；
② 非血标本送检须知：
结核感染时，有活性的效应T淋巴细胞主要集中在炎症反应的部位以对抗感染，如胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液、关节液等。血液中的效应T淋巴细胞只占所有效应T淋巴细胞的20-30%，因此，检测炎症部位体液的效应T淋巴细胞有利于区别结核感染和其他原因导至的炎症反应，对确诊结核病有重要的临床意义。
a. 采集量及抗凝剂的添加量：
胸水、腹水、心包积液：无菌密闭容器留取50ml以上，每100毫升加2500IU肝素（0.4ml）抗凝并立即混匀(推荐用盐水瓶（氯化钠注射液）留取，不能用饮料瓶、塑料酒精瓶等留取标本)；
关节液、脑脊液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀（因所能得到的体积比较小，可以用无菌带盖采集管留取）。
（注：抗凝剂肝素可以是“肝素钠注射液”2ml：1.25万单位，虽添加的肝素量不一定准确，但仍建议要添加。凝块会严重影响淋巴细胞的数量，如果发现有凝块不建议继续操作）；
b. 因检测需足够的淋巴细胞（T细胞），为提高实验效率或成功率，操作之前可以先查一下“体液常规”数据中有无淋巴细胞。（如果标本量不足导至试验失败，那么就需要再次留取标本，增加了医生的负担也增加了患者的痛苦，所以一定要记住哦！）
c. 建议同时送检病人血样；
d. 样本采集后4小时内必须送至实验室，常温保存（15-25℃），不可冷冻或冷藏；
e. 与外周血检测相比，浆膜腔积液T-SPOT.TB诊断结核性浆膜炎更有价值，但目前没有统一的正常界值，故暂不报阴阳性结果只报斑点数。

Q4
T-SPOT.TB的结果出来了，怎么理解这些数字呢？
T-SPOT.TB报告的内容包含：阳性对照情况；抗原孔结果（A孔或B空斑点数-空白对照孔的点数）；阴性对照情况。会出现下面几种情况：





图左：T-SPOT.TB阳性与阴性结果的对比度。图片来源：http://www.tspot.com/about-the-test/； 图右：T-SPOT.TB强阳性的结果图，肉眼计数情况下，目前我院报告中均会体现A孔和B孔的具体数目。
图片来源于复旦大学附属华山医院感染科实验室，国内最早开展T-SPOT.TB检测的实验室之一 。
!T-SPOT TB方法检测浆膜腔液中的T淋巴细胞，可以作为结核性浆膜腔炎诊断的新方法，其最佳临界值为14（A孔或B孔），当浆膜腔积液T-SPOT.TB与外周血T-SPOT.TB二者的斑点形成细胞数之比大于1时，更倾向于诊断结核性浆膜炎。
（参考文献：PLOSONE: Utility of T-Cell Interferon-c Release Assays for Diagnosing TuberculousSerositis: A Prospective Study in Beijing, China）

Q5
怎么解释T-SPOT.TB 阳性或阴性结果代表的含义？
拿到检验报告，知道了患者的检测结果是阳性还是阴性后，怎么解读这个结果呢？如何应用到实际的临床工作中？
①阳性结果
1.提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应T细胞，患者存在结核感染。T-SPOT.TB不能作为诊断活动性结核的金标准，必须结合患者的临床症状和其他的相关检查结果共同作出临床判断。
2.可能是其他分枝杆菌的感染引起，如M.kansasii（堪萨斯）、M.szulgai（苏氏）、M.marinum（海）、M.gordonae（戈登）分枝杆菌（这些分枝杆菌可致HIV患者机会感染）。
3.皮下注射PPD也许会造成T-SPOT.TB假阳性结果，因此需同时检测T-SPOT.TB和TST时，T-SPOT.TB的血样最好在TST实验前或者实验后3天内采取。
②阴性结果
提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T细胞。但若出现以下情况，阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染可能：
1.因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的；
2.免疫系统功能不全情况，如HIV感染者，肿瘤患者，儿童等；
3.其他免疫学或实验非正常操作的差异。
！！T-SPOT.TB并不能区分活动性结核病和LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险。从T-SPOT.TB检测原理来看，T-SPOT.TB检测的是人体对结核分枝杆菌特异性抗原的免疫反应（而非结核分枝杆菌本身），阳性结果提示患者体内存在被结核分枝杆菌（以及少数非结核分枝杆菌）致敏的T淋巴细胞。因此，T-SPOT.TB阳性的患者可能是活动性结核病患者或者是潜伏性感染的状态，是潜伏性还是活动性需要结合临床症状、影像学结果、诊断性抗结核疗效等。

涞源：翊曼生物科技