求助贴：核酸诊断的原料，DNA 和RNA 如何进行“原料验证？”

ds237 · 发表于 2015-6-30 16:07

登陆有奖并可浏览互动！

您需要登录才可以下载或查看，没有账号？立即注册

×

根据法规，要对原料进行检测或试样
DNA：外观：冻干粉
OD值：1.6-2.0
序列：ACCAACCCAACCACCACAC（举个例子）

我这针对上面的这个东西，要怎么进行检测或者试样呢?

如果进行检测，我们就要购买：测序仪-----买这个东西做别人出场做过的事？其实只是为了符合法规的一句要求。

如果不进行检测，进行试样------根据法规要保留有试样记录，而且相当于已经是冻融一次了，冻融次数越多，对产品的质量就会越有风险。

这个问题，各位老师是怎么理解的。

diana_zhang · 发表于 2015-6-30 17:36

在器械审评中心发布的《核酸扩增法检测试剂注册技术审查指导原则》对于引物的质检这样规定：
2.引物
由一定数量的dNTP构成的特定序列，通常采用脱氧核糖核酸（DNA）合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化。
冻干粉，序列正确，合成量应达到试剂生产要求。纯度应达到电泳级（PAGE）或HPLC级，不含杂带。应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如PAGE电泳结果或HPLC分析图谱。
应作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度计测定OD260nm/OD280nm的比值在1.6—2.0之间，可视为合格引物。-20℃保存。
3.探针
是指特定的带有示踪物（标记物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能与互补核酸序列退火杂交，用于特定核酸序列的探测。通常采用DNA合成仪人工合成，合成后经聚丙烯酰胺凝胶电泳或其他适宜方法纯化，在5'-端(和/或3'-端)进行标记，如荧光素报告基团或其他发光标记物，在3'-端标记荧光素淬灭基团，并经HPLC或其他适宜方法纯化。
冻干粉，纯度应达到HPLC纯。应提供合成机构出具的合成产物的质检证明，如HPLC分析图谱；应对探针的核酸序列及标记的荧光素或化学发光物进行核实，并作HPLC分析。应以可见—紫外分光光度计进行200—800nm扫描，在260nm处应有吸收峰。另外，根据标记荧光素的不同，还应该在荧光素的激发波长处有吸收峰，如FAM荧光素在494nm、TET荧光素在521nm、TAMRA荧光素在560nm处有特异的吸收峰，杂交探针在493nm、625nm、685nm处有特异的吸收峰，检定合格后入库。避光、-20℃保存。

另外，在每个专项产品的注册审评指南中也都包括了主要原材料的质检方法。
这些指南都可以作为企业制定原材料检验标准的依据。

ds237 · 发表于 2015-7-7 14:08

谢谢老师，我这边就是遇到这种情况：有质检报告，序列也有，电泳图谱也有。

但是我们没有测序仪。。。。坑死了。

diana_zhang · 发表于 2015-7-7 20:10

指南中并没有规定一定要做测序，而且目前PCR试剂生产企业有测序仪的企业并不多，为什么你一定要选择测序呢？质检标准应该从实际出发，选择合适的，企业可以实施且有意义的项目进行检查。

ds237 · 发表于 2015-7-16 09:41

因为按照逻辑原料进货：有质检报告+图谱到了公司以后，自己为了确认这个东西是否合格，也要进行一次检测，自己进行请验-----按照原料质量标准----检测---出报告书---QA 贴合格证给予原料放行。

我是按照这个逻辑去思考的，因为在药厂的时候就是这样做的，但是这个领域就像您说的，很少公司回去搞个什么测序仪，搞了测序仪再搞一个合成仪，我们干脆就自己做DNA了撒，就不用买了撒。

我们这边是希望可以用检查原料的合格证+质检报告+图谱这种方式来替代【原料的检测】不着调行不行