类风湿关节炎自身抗体的研究进展

检验医师

    类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种常见的系统性自身免疫性疾病，RA的基本病理改变是关节滑膜的慢性炎症，增生形成血管翳，侵犯关节软骨、软骨下骨、韧带、肌腱等，造成骨吸收、骨破坏和骨纤维化，最终导至关节畸形和功能丧失。RA的诊断主要依靠临床表现、自身抗体的检测和影像学检查，但早期的RA患者临床症状常不典型，类风湿因子特异性相对较低，X线表现多发生在关节受损之后，多因诊断困难而延误最佳治疗时机，因此寻找特异性自身抗体对RA进行早期诊断已成为近年来RA研究的热点。本文将对RA自身抗体的研究作一综述。

1、类风湿因子(RF)
    类风湿因子RF是诊断RA最早使用的血清学指标，是针对人或动物IgG分子Fc片断上抗原决定簇的特异抗体，有IgM—RF、IgG—RF、IgA—RF等类型，但临床上常检测的是IgM—RF，它在RA患者中的阳性率可达70％～80％，但其特异性不高。除RA外，RF尚可见于其他的自身免疫性疾病中(如干燥综合征)，感染性疾病(如慢性肺结核，肝炎)和3％～5％的健康人群中，甚至10％～30％的健康老年人中也可出现。Bas等研究发现，RA患者的临床表现和骨侵蚀性的损害主要与RF相关，故认为RF对预测疾病严重性有价值嘲，Vittecoq等也认为，类风湿因子RF能更好的预测RA患者的影像学进展，虽然RF有相对较低的特异性，但因其检测方便快速，灵敏度高，同时又是美国风湿病学会诊断类风湿关节炎的分类标准之一，目前仍得到广泛应用。隐性RF：隐性RF是RF与抗原IgG结合形成的免疫复合物，其中IgM—RF的活性被遮蔽，用常规检测方法不能检出，隐性RF在RF阴性的RA患者中阳性率可达37.5％，它在幼年型RA患者中的阳性率较高，可作为RA检测的补充，有助于提高检测的敏感性。

2、瓜氨酸相关自身抗体群
2.1 抗瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)
  2000年Schellekens将一条由19个氨基酸残基组成的肽段合成为环瓜氨酸肽(CCP)，以CCP为抗原用酶联免疫吸附试验(ELISA)法在RA患者中检测到抗CCP抗体，有很好的敏感性和特异性，分别为60％-75％和85％以上，明显高于RF。抗CCP抗体在RA早期就可出现，并与关节影像学改变密切相关，它的临床应用将更有助于对早期RA的诊断和治疗。国外很多学者研究认为，抗CCP抗体阳性的RA患者骨关节破坏程度较阴性者严重，表明抗CCP抗体的检测对预测RA患者疾病的严重性具有重要的应用价值。抗CCP抗体检测是近年来RA诊断的重大进展，特异性明显优于RF，并可以与RF互补，提高RA的诊断率。Vencovsky等认为，早期RA骨关节破坏与多种自身抗体密切相关，其中抗CCP抗体和RF是最为敏感的血清学指标，二种抗体的联合检测能更好的预测疾病的进展和关节破坏程度。Visser等也发现当抗CCP抗体与RF双阳性时对关节破坏的预测意义更大。虽然抗CCP抗体在RA的诊断中具有很高的特异性和敏感性，但也有报道认为，抗CCP抗体可能也存在于牛皮癣关节炎患者中。由于CCP可以大量人工合成，试剂稳定，检测方法简便快速，结果可靠，因此抗CCP抗体是目前所知的最有希望广泛应用于RA早期诊断的一种抗体，具有广泛的临床应用和研究前景。

2.2 抗角蛋白抗体(AKA)
  AKA，即抗鼠食道上皮角质层的抗体，对RA诊断具有特异性。AKA与RA病情严重程度和活动性有一定关系，在RA的早期甚至临床症状出现之前即可出现，因此它是RA早期诊断和判断预后的指标之一。有报道称，AKA阳性的“健康人”几乎均可发展成典型的RA。研究发现，AKA的靶抗原识别相对分子量为40kD的聚角蛋白微丝(filaggrin)，其成分含有瓜氨酸，可推测抗CCP抗体与AKA应该有很好的重叠性。

2.3 抗核周因子(APF)
  APF是用人颊粘膜上皮细胞做底物，通过间接免疫荧光法发现的一种RA相关自身抗体，他们存在于49％～91％的RA患者中，其特异性为73％～99％，国内学者研究认为，APF滴度与RA患者病情活动性评价等指标呈正相关。APF可以在疾病早期出现，但其检出率与病程长短元相关性，阳性往往提示预后欠佳，尤其是RF阴性而APF阳性患者。由于作为APF检测的抗原片颊粘膜上皮细胞很难获取和保存，这在一定程度上限制了它的推广。

2.4 抗聚丝蛋白抗体(AFA)
  随着对APF、AKA的深入研究，人们逐渐发现它们有相同的靶抗原，即上皮细胞分化终末阶段的细胞骨架成分聚角蛋白微丝蛋白(filaggrin)，filaggrin的特异性自身抗体即为AFA。通过对滑膜组织的研究发现，AFA由RA患者滑膜组织的浆细胞分泌，因此，AFA可能参与RA的发病，并可能与软骨和骨的破坏有关。该抗体在滑膜组织中积聚，主要作用于其中的二种蛋白质，即p64—78和p55—61，引起自身免疫反应，参与RA的发病，AFA可在RA的早期甚至临床症状出现之前出现，可作为RA早期诊断的指标，且该类患者病情进展较AFA阴性者快，骨破坏更严重。但由于AFA抗原提取多源于正常人乳房形成术切除的皮肤及婴儿包皮，因而限制了临床应用。

2.5 抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(抗MCV抗体)
  近年来发现的抗MCV抗体对RA具有较高的敏感性和特异性，分别为78％、95％。波形蛋白是重要的细胞骨架蛋白，它在凋亡的巨噬细胞内被瓜氨酸化，从而改变了蛋白结构并增加了潜在的抗原决定簇，波形蛋白在凋亡细胞内因得不到及时清除而持续存在，从而促进了抗MCV抗体的产生。抗MCV抗体因其有多个潜在抗原决定簇而优于抗CCP抗体，同时抗MCV抗体采用ELISA法测定，操作简便快捷，具有广泛的临床应用和研究前景。

2.6 抗Sa抗体
  1994年Despres发现抗Sa抗体，该抗体在RA中的敏感性为20％～47％，特异性为95％以上。Sa抗原分子量为48～50kD，是存在于人胎盘、脾和RA患者血管翳的一种非核抗原，有研究发现，抗Sa抗体的靶抗原为瓜氨酸化的波状蛋白(vimentin)，抗Sa抗体可出现在RA早期并提示预后不良。Gilles等比较了抗Sa抗体，抗CCP抗体和RF对早期多关节炎患者疾病严重性的评估，发现抗Sa抗体可独立作为预示疾病严重性的血清学指标，与关节的损害程度密切相关。由于在抗原底物的获得和保存上存在技术困难，以及试验结果判断不易标准化，使得无法推广应用。

  现已有研究证实AFA、APF、AKA、抗CCP抗体、抗Sa抗体和抗MCV抗体在化学结构上具有相关性，均以含瓜氨酸的filaggrin片断为抗原识别位点，因此有人将上述抗体统称为瓜氨酸相关自身抗体(anti—eitrullinated protein auto antibodies，AC—PA)，但几种抗体的检测结果并不完全重叠，可以互相补充，几种抗体的联合检测可明显提高RA诊断的敏感性。

3、抗Bip抗体
  抗Bip抗体的靶抗原为内质网免疫球蛋白结合蛋白，属于热休克蛋白Hsp家族成员，是分布广泛的分子伴侣，Bip能刺激RA滑液CD8+T细胞增殖并产生IL一10等细胞因子，调节炎症反应的发生。Bip抗体存在于RA患者的滑液和血清中，有文献报道，抗Bip抗体在已确诊的RA患者中其敏感性和特异性分别为73％和71％，在早期的RA患者中分别为66％和65％，因此抗Bip抗体对RA的早期诊断有很重要的意义。

4、抗RA33抗体
  1989年Hassfeld等用免疫印迹法在RA患者的血清中检测到RA33抗体，它是能与相对分子量为33KD的核酸蛋白产生特异性反应的IgG型自身抗体。现国内外已公认血清抗RA33抗体有助于RA的早期诊断，关于抗RA33抗体在RA患者中的阳性率国内外报道不一，其敏感性在35％～45％，特异性可达90％，抗RA33抗体可出现在早期不典型的RA患者中，但抗RA33抗体不是类风湿性关节炎的特异性抗体，它不仅在RA中出现，在SLE和MCTD等病中也有较低阳性率。

5、抗Ⅱ型胶原抗体
  其靶抗原可能来源于关节，并通过介导细胞及体液免疫反应参与关节炎的发生和发展，溴化氰能把各种属Ⅱ型胶原消化成若干个片断，有类似的位点特异抗体。RA患者的主要位点特异抗体是CBl0、CBll。Ⅱ型胶原蛋白作为一种与RA相关的抗原，在RA的发病机制中起着重要的作用。Andrew等报道，CBl0可存在于88％的RA患者的血清中，且在早期RA患者中的阳性率高于晚期的RA患者，结合RF、抗CCP抗体的检测，将有更可靠的预测疾病的价值，同时为我们研究RA的发病机制提供了很大的帮助。

6、抗葡萄糖-6-磷酸异构酶抗体(抗GPI抗体)
  该抗体是在K／BXN转基因鼠的关节炎模型中发现的，将这种抗体转移给健康小鼠可诱导关节炎的发生。抗GPI抗体为关节外抗原致病机制的研究提供了有意义的证据。RA关节液中抗GPI抗体滴度比血清中明显提高，表明该抗体可能在滑膜组织局部产生，Jouen等报道，在RA患者血清中抗GPI抗体的阳性率约为45.4％，但特异性仅75.0％，且抗体的出现与RA患者预后无关，抗GPI抗体不是RA的特异性抗体，它也可以存在于其他类型关节炎患者中。

7、抗钙蛋白酶抑素抗体(ACAST)
  钙蛋白酶是可溶性的钙依赖半胱氨酸蛋白酶，能够降解结缔组织基质，在RA关节炎症与骨质破坏中起着重要作用。钙蛋白酶抑素是特异性的钙蛋白酶抑制剂，能够使活化的钙蛋白酶失活。目前认为钙蛋白酶一钙蛋白酶抑素系统参与了类风湿关节炎的发病。有报道认为在RA患者体内可能存在抗钙蛋白酶抑素自身抗体(anti-bodies toe alpstatin，ACAST)，ACAST与钙蛋白酶抑素结合，使钙蛋白酶抑素减少，不能有效的降解钙蛋白酶，致使钙蛋白酶在关节中增多，引起关节软骨基质降解和骨破坏。最近waki—Egawa等用红细胞钙蛋白酶抑素作为抗原，用ELISA法检测ACAST，结果显示，在RA的敏感性为82.8％，特异性96.1％，故认为ACAST对RA诊断具有很高的价值。

8、其他抗体
  除上述几种抗体外，RA患者中也可见其他抗体，抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)在RA早期就可出现，并可预测关节损害程度。抗RA相关核抗原(RANA)抗体可见于65％～95％的RA患者，显著高于其他结缔组织病，且在RF阴性的RA患者中可有38．5％的阳性率。此外，抗磷脂抗体，抗RNP抗体也可出现在RA患者中，但由于缺乏特异性，敏感性较低，所以很少应用于临床工作中。总之，上述所提到的几种抗体均有助于对RA的早期诊断，可提高对RA诊断的特异性和敏感性，其中抗CCP抗体是最有希望广泛应用于RA早期诊断的抗体。随着第二代抗CCP抗体的出现，其对RA诊断的敏感性和特异性明显提高，Quinn等报道，第二代抗CCP抗体对早期的RA患者，特别是血清反应阴性的RA患者有很重要的诊断意义。Raza等报道，第二代抗CCP抗体和RF抗体的联合应用能更好的预测早期滑膜炎RA患者病情的发展及其严重性，而几种抗体的联合应用，可弥补RF对RA诊断的不足，对提高RA诊断的阳性率、预测RA患者病情的严重性都有很重要的应用价值。

来源：中华检验医学网