上海优宁维生物科技有限公司 R& D Systems位于细胞生物学行业领先地位，2009年NATURE系列刊物就有790篇论文使用R&D Systems的产品。高质量的IHC抗体不仅提供低背景高信号的染色结果，而且可以反映组织生理学的真实结果。R& D Systems抗体交叉反应低，特异性高，保证了真实可靠的信号结果。
1. R&D Systems一抗的质量如何？
为保障实验结果的可靠性，使用低交叉反应的高品质抗体。RD抗体主要采用活性重组蛋白作为免疫原，而不是人工合成的多肽。IHC/ICC抗体经过实验多重筛选及不同组织测试，避免了由于抗体的品质问题而导致的科研人员时间与样本的浪费，保证了真实可靠的信号结果。 2. R&D Systems一抗IHC应用区分石蜡和冰冻切片吗？区分IHC和ICC吗？
R& D Systems抗体经过不同的细胞及组织材料的筛选，能特异性识别石蜡和冰冻切片中的抗原，IHC和ICC相互通用。 3.做IHC/ICC, 选择单抗还是多抗？
单抗和多抗的固有特性决定了其优劣势。单抗，由单个B细胞克隆产生的，具有高亲和力和针对单个抗原表位的特异性。如需检测具有相同氨基酸序列的蛋白家族，单抗就非常适合。单抗和抗原结合的效果取决于抗原能否保持其天然构象。但是抗原的构象一旦由于各种原因发生改变，如由于蛋白相互作用，翻译后修饰，温度，pH，固定，盐浓度等，单抗和抗原结合的效果会受到严重影响。 由于多抗可以识别多个表位，不太受蛋白质构象变化的影响。一般来说，在一定的pH值和盐浓度范围内，多抗也比单抗更加稳定。基于这些原因，多抗比单抗更适合IHC/ICC实验。与其他公司多抗不同，R& D Systems有一类经抗原亲和纯化的多抗（货号以AF开头），该多抗通过抗原亲和柱的纯化提高了特异性，更加适合IHC/ICC实验。 4.一抗试剂的孵育条件？一抗浓度，温度，时间？
一抗抗体浓度，稀释，孵育时间和温度都会影响染色质量。这些变量需要针对不同抗体和样品进行优化，以达到高特异性，低背景的信号。一般的优化过程是，保持固定的孵育时间和温度，同时改变抗体的浓度以决定最佳的低噪音背景的信号。例如，使用一只高亲特异性抗体，可以使用相对较高的抗体浓度配套较短的孵育时间；或者，相对较低的抗体浓度配套较长的孵育时间。为促进特异性染色，常选用较长的孵育时间及较低温度下进行（如室温和4°C）。
R＆D Systems的染色优化方案: 对于组织切片，起始优化条件是4°C孵育过夜; 对于染色细胞，起始优化条件是室温孵育1小时。经抗原亲和纯化的多抗 (1.7-15 ug/mL) 较单抗(5-25 ug/mL)的工作液浓度低。如使用不同浓度的同一抗体比较样本的染色效果，孵育时间和温度一定要一致。在实验室中使用新抗体时，建议进行预实验测试教广的抗体浓度。 一抗孵育的起始优化条件
| 样本 |
抗体 | 单抗 | 多抗 | 组织 | 5-25 ug/mL，4°C孵育过 | 1.7-15 ug/mL，4°C孵育过 | 细胞 | 5-25 ug/mL，室温孵育1小时 | 1.7-15 ug/mL，室温孵育1小 | 优势 | 单抗原表位特异性 | 工作浓度低 |
劣势 | 易受抗原表位的变化影响 | 非特异性高，需经过抗原亲和纯化 |
|
5.做石蜡切片IHC，推荐什么抗原修复技术?
背景知识：日常工作中所使用的10％福尔马林固定的石蜡包埋组织，经常产生蛋白交联反应遮蔽了组织内某些蛋白抗原，阻碍了抗原与抗体的结合。为了打开蛋白间的交联，使被封闭的抗原充分暴露，抗原修复技术在免疫组化操作过程中是个极其重要的环节，不同抗原修复方法直接影响免疫组织化学染色结果的表达。 R&D Systems建议客户采用热修复的方法，并提供了高度优化的抗原修复试剂，有效修复抗原并提高免疫反应的效果：碱性抗原修复液(Catalog # CTS013), 酸性抗原修复液 (Catalog # CTS014) ，中性pH 7.0抗原修复液(Catalog # CTS015) ，含有前3种修复液的综合修复液 (Catalog # CTS016)。在R&D Systems的实验室中, 我们发现使用碱性抗原修复 (Catalog # CTS013)容易取得良好的修复效果。 | 抗原未修复 | | 抗原修复后 | | | 人小脑组织Neuroplastin 65
一抗：3 μg/mL goat anti-human/mouse Neuroplastin 65 polyclonal antibody ：Catalog # AF5360
抗原修复：Antigen Retrieval Reagent-Basic (Catalog # CTS013).
染色：Anti-Goat HRP-DAB Cell & Tissue Staining Kit (brown, Catalog # CTS008) and counterstained with hematoxylin (blue). |
6.如何做对照?
合适的对照对解释IHC/ICC的结果的真实性是至关重要的。一个令人满意的IHC/ICC实验设计会有力显示抗原位于正确的特定组织，细胞类型，或亚细胞位置。我们推荐：Endogenous Tissue Background Control，No Primary Antibody Control，Isotype Control，Absorption Control，Tissue Type Control。
7.做IHC，如何避免非特异性染色？如何选择染色试剂盒？
所有IHC/ICC研究具体取决于抗体抗原结合，由疏水作用，离子相互作用，氢键结合以及其他分子间作用力等控制。然而，同样的引力也可能导致非特异性染色，即一抗结合了抗原表位以外的氨基酸。这是在IHC/ICC中是一个常见的问题。我们面临的挑战是减少非特异性相互作用，而不影响抗体的抗原表位结合。
非特异性染色的原因包括一抗和二抗与和血清蛋白的相互作用，抗体和组织间的离子相互作用，能影响IHC检测系统的内源性分子的相互作用。这些问题可能导致高背景从而无法观察到目标蛋白的表达位置。通过使用阻断剂(a blocking reagent)，可以修正非特异性染色体，而这些修正步骤都必须在一抗孵育之前完成。
优点 - 即开即用
- 高检测灵敏度
- 适合冰冻切片，石蜡包埋切片，悬浮细胞等，
- 适合细胞涂片(cytospin)(如淋巴细胞，单核细胞，转染细胞)
- 适合多种一抗，如goat, mouse, rabbit, rat, sheep IgG.
组分 - 4种封闭试剂（过氧化酶, 亲和素,生物素, 血清）
- 高特异性生物素二抗
- 高灵敏链酶亲和素HRP（HS Streptavidin-HRP)
- DAB (褐色) or AEC (红色) 染料和缓冲液
| 
/3 
浙公网安备33010802005999号 
2024庆中秋、迎国庆
2024庆【网站十一周
2023庆【网站十周年
2022庆【网站九周年
2021庆中秋、迎国庆
2021庆【网站八周年
雷达卡
发表于 2014-4-9 16:37
提升卡
楼主
