关于抗体保存，这6个关键点你一定要知道！

生物科研实验室

抗体，作为免疫学实验中不可或缺且成本高昂的工具，即便是国产品牌，每100微升的一抗也价格不菲，往往超过千元大关。考虑到其昂贵的价格与严格的运输存储要求，确实令人感到不小的挑战。接下来，让我们一同梳理抗体运输与储存的几个关键点，希望为科研同仁提供实用指南。
01运输条件优化抗体在运输途中通常耗时约2-3天，此过程必须在严格控制的低温环境下进行。低温运输主要依赖冰袋或干冰，但鉴于多数抗体推荐在4℃或-20℃条件下保存，而干冰的极低温度（-78.5℃）会导至抗体冻结。
若选择干冰运输，抗体在到达目的地后按说明书转移至4℃或-20℃存储时，将经历额外的冻融循环，这可能损害其活性。因此，更倾向于采用4℃的运输条件，旨在减少反复冻融对抗体效能的不利影响。02必要的离心处理收到抗体后，无论其形态为液态还是粉末状，首要步骤（在开启瓶盖之前）是进行离心操作。一般建议在4℃条件下，以12000转/分钟的速度离心3分钟。对于小体积抗体（例如20微升、50微升等小规格），可适当增加离心时间。
这一步骤至关重要，因为运输途中的震动可能导至抗体液滴或粉末附着于管盖及管壁，肉眼难以察觉。直接开启瓶盖极有可能造成抗体意外洒出，导至宝贵资源的损失。因此，通过离心使抗体沉积至管底，是确保安全使用的关键一步。03储存温度的选择实验室常配备有4℃、-20℃和-80℃三种不同温度的冰箱，以应对不同试剂的储存需求。那么，抗体应如何选择合适的储存温度呢？答案并非一成不变，而是需根据产品说明书来确定。
这是因为不同品牌、种类的抗体，由于其产品特性（如形态、是否标记）、添加剂（如甘油、叠氮钠、牛血清蛋白）的差异，对储存条件有着各自独特的要求。总结如下：1、液态抗体：这类抗体作为活性蛋白溶液，若置于-80℃环境下会结冰，而反复冻融过程可能导至蛋白变性及多聚体形成，从而降低抗体的有效浓度及结合能力。因此，液态抗体的储存推荐4℃或-20℃。
若未添加甘油，4℃条件下可保存约一个月；若添加了甘油，-20℃条件下则可保存一年以上。但请注意，即使超过一年，抗体也并非立即失效，只是其效价会逐渐降低。此外，抗体的储存环境、使用频率及其本身的稳定性也会影响保存期限。
2、特殊抗体：流式抗体由于标记物为荧光素（如FITC、PE、APC等），对光敏感，且低温可能干扰荧光素与抗体的偶联，导至荧光素脱落。因此，这类抗体通常推荐在不加甘油的情况下，于4℃避光保存。
HRP（辣根过氧化物酶）标记抗体虽无需特别避光，但一般推荐加甘油后于-20℃保存。不过，HRP的底物则需4℃避光保存。即用型抗体是厂家已配制好的工作液，可直接使用，建议于4℃保存。
以上储存时间均指新订购的抗体溶液。对于自行稀释的工作液，建议现配现用，不建议重复利用。若需短期保存（一至两周），可选择4℃。
3、冻干粉抗体：这类抗体稳定性高，可在-20℃或-80℃条件下长期保存（长达数年），在4℃环境下也相对稳定。综合考虑取用方便性和保存时间，冻干粉抗体一般推荐于-20℃保存。溶解后，其保存条件即变为液态抗体的要求。04稳定剂的应用抗体，作为一类活性大生物分子，其储存环境需维持高度稳定。为实现这一目标，我们可向抗体溶液中加入特定添加剂，以稳定其性质。以下是三种常用的稳定剂：
1、甘油（Glycerol）：甘油在抗体溶液中扮演保护剂的角色，它能有效降低溶液的冰点。当甘油浓度达到50%（v/v）时，可将抗体溶液的冰点降低至-20℃以下，从而确保溶液在储存过程中不会结冰，有效避免了因冻融而导至的抗体损伤。然而，值得注意的是，无论甘油浓度如何，都无法使抗体溶液的冰点降至-80℃以下，因此在-80℃的储存条件下，加入甘油的抗体溶液仍会结冰。
2、叠氮钠（NaN₃，Sodium Azide）：叠氮钠则是一种高效的防腐剂，常用于抗体溶液中，以抑制微生物生长，防止抗体被污染，从而延长其保存时间。叠氮钠的常用工作浓度为0.02%（w/v）。然而，叠氮钠具有剧毒性，其本质为呼吸链阻断剂，与氰化物类似，能阻断生物氧化呼吸链的末端反应。此外，叠氮钠易与金属发生反应，因此严禁使用铁勺等金属工具取用；同时，它还具有易爆性，必须避免猛烈碰撞。
由于叠氮钠的生物毒性，它并不适用于活细胞或体内实验的抗体。另外，叠氮钠还会抑制HRP（辣根过氧化物酶）的活性，因此也不能用于HRP标记的抗体。在必要时，可通过透析或超滤等方法，去除抗体溶液中的叠氮钠。
3、牛血清蛋白（BSA）：牛血清蛋白一般作为抗体稳定剂。通常情况下，蛋白质以高浓度保存会更加稳定，不易发生降解和变性，BSA的添加可以让抗体溶液整体的蛋白浓度增加；同时抗体蛋白会被塑料或玻璃材质的管壁吸附，降低有效浓度，加入抗体稳定剂则会通过竞争性结合减少这种吸附效应。05分装技巧优化分装是保护抗体免受反复冻融损伤、减少因多次移液而引入污染风险的有效策略。反复冻融会导至抗体变性，促使抗体聚合，进而削弱其结合能力。针对普通抗体的分装，我们应遵循以下原则：
1、针对常规抗体：这类抗体通常在出厂时已添加了50%的甘油，因此在-20℃条件下保存时不会结冰，有效避免了反复冻融的风险。在分装时，我们只需根据实际使用需求，将其分装成适宜的小份即可。
2、注意分装影响：鉴于抗体溶液的体积往往较小，分装过程中需特别警惕管壁的吸附效应及水蒸气的冷凝效应。这两种效应均可能导至分装后抗体的有效浓度降低，进而影响其效价。为减少这些影响，分装时应尽量精确操作，减少抗体在管壁上的残留，并严格控制分装环境的湿度，以减少冷凝作用。06特殊抗体保存指南1、酶标记抗体：涉及碱性磷酸酶与辣根过氧化物酶的抗体，对冷冻条件极为敏感。短期保存推荐在4℃环境下进行。若需长期保存，则应置于终浓度为50%的甘油中，并维持在-20℃条件下。尽管部分酶在无保护剂情况下亦能于-20℃存储，但务必分装处理，因为反复冻融过程会削弱酶活性或导至抗体聚集，进而影响其结合效能。
2、流式抗体（荧光素标记）：这类抗体因标记有荧光素（如FITC、PE、APC等），故对光线极为敏感，必须采取避光保存措施。特别地，蛋白类荧光素因其荧光基团内嵌于蛋白结构中，冷冻会破坏蛋白构象，降低荧光效率；而化学荧光基团则会在反复冻融后发生淬灭。因此，最佳保存方案为在不加甘油的情况下，于4℃避光环境中储存。