一文搞定免疫组化结果分析，超实用！

生物科研实验室

免疫组化（IHC）技术：基于抗原与抗体的特异性结合机制，通过抗体标记组织细胞内的蛋白质，并利用化学反应显色，以精确识别这些蛋白质在组织细胞中的位置及其表达水平。
免疫组化结果解析1. 对照设置：正确解读染色结果需依赖阳性对照（验证表达的组织，用以排除假阴性）与阴性对照（验证不表达的组织，用以排除假阳性）。
2. 阳性判定：仅当抗原特异性地表达于细胞或组织的预定部位时，方可判定为阳性；非特异性部位的表达不得视为阳性。
3. 表达强度与数量：阳性表达存在强弱及数量的差异；即使仅个别细胞在抗原预期部位呈现阳性，亦应视为阳性表达。
4. 阳性标记色度：阳性着色强度受抗原含量、分布密度、标记方法及敏感性的影响。具体而言，抗原含量越高、分布越密集、标记方法越灵敏，阳性显色越强烈。颜色上，淡黄色代表弱阳性，棕黄色为中度阳性，而棕黑色则指示强阳性。
5. 细胞学标记特征：反映抗原在细胞内的精确定位与分布模式。具体类型如下：胞膜型：抗原沿细胞膜表面分布，形成一圈薄层的棕黄色颗粒环绕细胞。
胞核型：抗原定位于细胞核内，可均匀分布或集中于核膜下，部分呈小斑块状不规则排列。
胞浆型：抗原分布于细胞浆中，此类型最为常见，表现为弥漫性或局限性分布。
微绒毛型：主要见于腺癌细胞的微绒毛上。
复合型：可同时在细胞膜与细胞浆中表达。PART.2免疫组化结果呈现1. 放大观察：采用低倍镜、高倍镜或低倍镜结合高倍镜进行综合观察。
2. 数据统计：可选择不提供统计数据，或按视野进行统计，亦可基于生物学样本重复进行实验数据统计。
3. 图像采集：针对每个样本，采集x张低倍镜图像与y张高倍镜图像，总计x*y张图片。
4. 关键指标展示：明确蛋白位于细胞内或细胞外，评估蛋白表达的特异性，对比对照组与实验组的差异点。具体指标如下：阳性面积比例：计算阳性细胞面积占总面积的比例（针对细胞外定位），通过数量或比例体现差异。具体步骤包括分别测量阳性面积与总面积，采用颜色去卷积、设定图像阈值及测量值。
染色强度分析：测量阳性区域的平均光密度(OD)值（适用于细胞内外定位），以评估表达强度差异。操作包括筛选阳性区域(ROI)，计算平均OD值，并利用IHC Toolbox进行背景去除与OD值校正。
阳性细胞比例：计算阳性细胞占总细胞数的比例（针对细胞内定位），反映细胞特异性及数量或比例差异。方法涉及阳性细胞与细胞核数目的计算，结合颜色去卷积与分析颗粒数。
阳性细胞密度：计算单位视野面积内的阳性细胞数（针对细胞内定位），同样体现细胞特异性及数量差异。此指标需测量阳性细胞数目与视野面积，利用Fiji等工具进行标尺与面积的测定。PART.3免疫组化结果评判方法01 积分评估法：该方法通过对切片中细胞的染色强度及阳性细胞范围进行评分，并将两者得分相乘得出最终结果。具体评分标准如下：染色强度：分为四级。无阳性着色（阴性）计0分；淡黄色（弱阳性）计1分；棕黄色（阳性）计2分；棕褐色（强阳性）计3分。
阳性细胞百分比：同样分为四级。≤25%计1分；26%-50%计2分；51%-75%计3分；＞75%计4分。最终评分通过将上述两项得分相乘得出。
02 阳性细胞计数法：此方法用于评估某物质在组织中的存在及其数量，重点在于判断物质的数量而非表达强度。直接计数：在20倍镜下随机选取5个视野，计算阳性细胞数，并求取平均数作为该切片的阳性细胞数。
单位面积计数：另一种方法是统计20倍镜下的细胞数，然后除以镜下面积，得出细胞密度，单位表示为cells/mm²。