流式细胞分析分选系统都有那些用途啊？请尽量详细点

病理医师

最近想仔细了解一下流式细胞分析分选系统，不知道哪位大侠熟悉，帮忙解答一下！多谢啦！
原文地址：https://www.zhihu.com/question/21295607

检验医师

产品信息





CD4磁珠可用于对细胞进行磁性标记。标记后，将细胞悬液加载到分选柱上，该柱放置在含分选器的磁场中。 磁性标记的CD4+细胞被保留在柱内。未标记的细胞贯穿其中而被去除。将分选柱从磁场中移除之后，洗脱磁性标记的CD4+细胞作为阳性选择的细胞。
· 高磁珠结合力
·  简便、快捷
·  高纯度、高得率、高活率


<hr/>使用方法

试剂和仪器要求
1.缓冲液: （pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA，2-8C)。
2.分选柱和分选器
3.(可选)用于流式细胞术分析的荧光偶联CD4抗体。
4.(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
5.(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。

<hr/>操作步骤

一、样本准备
当处理抗凝的外周血液时，应通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)。
在处理组织时，用标准的制备方法制备单细胞悬浮液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300g 离心10min，去除上清。
3.每 10⁷细胞，用80μL缓冲液重悬。
4.每 10⁷细胞，用20μLCD4磁珠混匀。
5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育，需要增加孵育时间;如果是常温孵育，会增加非特异结合)。
6.(可选)加入染色抗体，在2-8℃避光孵育5分钟。
7.每10⁷细胞，加入1-2mL缓冲液洗涤，300g离心10min，弃上清。
8.用 500μL 缓冲液重悬细胞。
三、磁性分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液，充分湿润分选柱（xM: 500μL；xL: 3 mL）
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上，没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液，待液体全部流尽，再加入适量缓冲液，一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。（xM: 3X500μL；xL: 3x3mL）
5.将分选柱从分选器中取出，并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中，迅速用塞子推下，得到就是目的细胞。（xM: 1mL；xL: 5 mL）
7.(可选)为了提高标记细胞的纯度，洗脱部分可以在第二个xM或xL柱上富集。使用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁选过程。
CD4磁珠-CD4分选磁珠<hr/>保存方法

在2-8℃条件下避光保存，请勿冷冻。有效期见试剂外标签。

同花顺

想了解更多流式细胞相关可以关注美天旎的流式小白系列文章~
美天旎官方账号：流式小白系列 | 一文读懂流式细胞仪！

感恩由您

最近写了一篇《新手小白如何开始第一个流式实验》，欢迎感兴趣的人前往阅读。

同花顺

对照组结果：由左至右依次为图一、图二、图三。①图一：横坐标表示细胞大小，纵坐标表示颗粒度，根据颗粒度及细胞大小，得出最左下角为细胞碎片，用红线框定的为活细胞，这块区域为淋巴细胞。占样品量的50.61%，分析红圈中框定的细胞，得出图二、图三。②图二：横坐标（FITC标记CD19），CD19为B细胞表面

对照组结果（就是打了生理盐水的那一组）：由左至右依次为图一、图二、图三。
①图一：横坐标表示细胞大小，纵坐标表示颗粒度，根据颗粒度及细胞大小，得出最左下角为细胞碎片，用红线框定的为活细胞，这块区域为淋巴细胞。占样品量的50.61%，分析红圈中框定的细胞，得出图二、图三。
②图二：横坐标（FITC标记CD19），CD19为B细胞表面标志物；纵坐标（PerCP标记CD3），CD3为T细胞表面标志物。因此Q2-4区域表示CD19单阳，表示B细胞占比为26.89%。同理，Q2-1区域表示CD3单阳，表示T细胞占比为50.96%。
③图三：横坐标（APC标记CD4）,CD4为Th细胞表面标志物；纵坐标（PE标记CD8a）,CD8a为CTL表面标志物。Q3-4区域表示CD4单阳，得出Th细胞占比为39.22%，Q3-1表示CD8a单阳，得出CTL占比为15.17%。



实验组组结果（就是打了体外抗原的）：由左至右依次为图一、图二、图三。
①图一：横纵坐标同上，用红线框定的为活细胞，这块区域为淋巴细胞。占样品量的57.63%，分析红圈中框定的细胞，得出图二、图三。
②图二：横纵坐标同上。Q2-4区域表示CD19单阳，表示B细胞占比为43.74%。同理，Q2-1区域表示CD3单阳，表示T细胞占比为38.35%。
③图三：横纵坐标同上。Q3-4区域表示CD4单阳，得出Th细胞占比为31.20%，Q3-1表示CD8a单阳，得出CTL占比为9.94%。
由实验组与对照组进行比较，得出实验组在注入外部抗原后，淋巴细胞总体数量上升，B细胞数量大幅上升，T细胞数量明显下降；Th细胞与CTL细胞数量也下降，但CTL下降更明显。说明在注入外来抗原后，小鼠发生免疫应答，且主要为体液免疫应答。

大力水手

不知道你的这个问题是否有了答案，作为入行流式的技术，我帮你回答吧，流式的应用可以是：1.细胞表面标志的检测：细胞免疫表型分析、其它表面蛋白分析等。
2.细胞内蛋白的检测：细胞因子、细胞骨架分子和胞质酶类等。
3.细胞内离子浓度检测：H+、Na+、K+、Ca2+等。
4.细胞核成分检测：细胞周期、DNA总量分析等。
5.细胞膜：流动性、膜电位、膜通透性等。
6.细胞功能：如细胞死活判定、pH值、增殖与凋亡、抗药性等。
7.基因表达：内源及外源基因表达，荧光报告基因的表达和转染效率判定。
8.细胞分选：可同时进行2路或4路分选以及细胞克隆、成分分选等特殊分选。