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[分享] 流式细胞分析分选系统都有那些用途啊?请尽量详细点

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发表于 2024-9-20 23:12 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2024-9-20 23:12 | 显示全部楼层
产品信息





CD4磁珠可用于对细胞进行磁性标记。标记后,将细胞悬液加载到分选柱上,该柱放置在含分选器的磁场中。 磁性标记的CD4+细胞被保留在柱内。未标记的细胞贯穿其中而被去除。将分选柱从磁场中移除之后,洗脱磁性标记的CD4+细胞作为阳性选择的细胞。
· 高磁珠结合力
·  简便、快捷
·  高纯度、高得率、高活率


<hr/>使用方法

试剂和仪器要求
1.缓冲液: (pH7.2 PBS、0.5% BSA、2 mM EDTA,2-8C)。
2.分选柱和分选器
3.(可选)用于流式细胞术分析的荧光偶联CD4抗体。
4.(可选)PI(碘化丙啶)或7-AAD 用于流式细胞术排除死亡细胞。
5.(可选)预分离过滤器用于去除细胞团块。

<hr/>操作步骤

一、样本准备
当处理抗凝的外周血液时,应通过密度梯度离心法分离外周血单核细胞(PBMC)。
在处理组织时,用标准的制备方法制备单细胞悬浮液。
二、磁珠标记
1.细胞计数。
2.300g 离心10min,去除上清。
3.每 10⁷细胞,用80μL缓冲液重悬。
4.每 10⁷细胞,用20μLCD4磁珠混匀。
5.(2-8)℃冰箱避光孵育15min(如果是在冰上孵育,需要增加孵育时间;如果是常温孵育,会增加非特异结合)。
6.(可选)加入染色抗体,在2-8℃避光孵育5分钟。
7.每10⁷细胞,加入1-2mL缓冲液洗涤,300g离心10min,弃上清。
8.用 500μL 缓冲液重悬细胞。
三、磁性分选
1.将分选柱放置在分选器的磁场中。
2.将分选柱中加入适量缓冲液,充分湿润分选柱(xM: 500μL;xL: 3 mL)
3.将细胞悬液加到分选柱中。
4.结合磁珠的细胞会被吸附到分选柱上,没有结合的细胞会顺着液体流下来。加适量的缓冲液,待液体全部流尽,再加入适量缓冲液,一共洗3次。收集总流出物。这是未标记的细胞。(xM: 3X500μL;xL: 3x3mL)
5.将分选柱从分选器中取出,并将其放在合适的收集管上。
6.加适量的缓冲液到分选柱中,迅速用塞子推下,得到就是目的细胞。(xM: 1mL;xL: 5 mL)
7.(可选)为了提高标记细胞的纯度,洗脱部分可以在第二个xM或xL柱上富集。使用新的分选柱重复步骤1至6中描述的磁选过程。
CD4磁珠-CD4分选磁珠<hr/>保存方法

在2-8℃条件下避光保存,请勿冷冻。有效期见试剂外标签。
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发表于 2024-9-20 23:13 | 显示全部楼层
想了解更多流式细胞相关可以关注美天旎的流式小白系列文章~
美天旎官方账号:流式小白系列 | 一文读懂流式细胞仪!
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发表于 2024-9-20 23:14 | 显示全部楼层
最近写了一篇《新手小白如何开始第一个流式实验》,欢迎感兴趣的人前往阅读。
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发表于 2024-9-20 23:14 | 显示全部楼层


对照组结果:由左至右依次为图一、图二、图三。①图一:横坐标表示细胞大小,纵坐标表示颗粒度,根据颗粒度及细胞大小,得出最左下角为细胞碎片,用红线框定的为活细胞,这块区域为淋巴细胞。占样品量的50.61%,分析红圈中框定的细胞,得出图二、图三。②图二:横坐标(FITC标记CD19),CD19为B细胞表面

对照组结果(就是打了生理盐水的那一组):由左至右依次为图一、图二、图三。
①图一:横坐标表示细胞大小,纵坐标表示颗粒度,根据颗粒度及细胞大小,得出最左下角为细胞碎片,用红线框定的为活细胞,这块区域为淋巴细胞。占样品量的50.61%,分析红圈中框定的细胞,得出图二、图三。
②图二:横坐标(FITC标记CD19),CD19为B细胞表面标志物;纵坐标(PerCP标记CD3),CD3为T细胞表面标志物。因此Q2-4区域表示CD19单阳,表示B细胞占比为26.89%。同理,Q2-1区域表示CD3单阳,表示T细胞占比为50.96%。
③图三:横坐标(APC标记CD4),CD4为Th细胞表面标志物;纵坐标(PE标记CD8a),CD8a为CTL表面标志物。Q3-4区域表示CD4单阳,得出Th细胞占比为39.22%,Q3-1表示CD8a单阳,得出CTL占比为15.17%。



实验组组结果(就是打了体外抗原的):由左至右依次为图一、图二、图三。
①图一:横纵坐标同上,用红线框定的为活细胞,这块区域为淋巴细胞。占样品量的57.63%,分析红圈中框定的细胞,得出图二、图三。
②图二:横纵坐标同上。Q2-4区域表示CD19单阳,表示B细胞占比为43.74%。同理,Q2-1区域表示CD3单阳,表示T细胞占比为38.35%。
③图三:横纵坐标同上。Q3-4区域表示CD4单阳,得出Th细胞占比为31.20%,Q3-1表示CD8a单阳,得出CTL占比为9.94%。
由实验组与对照组进行比较,得出实验组在注入外部抗原后,淋巴细胞总体数量上升,B细胞数量大幅上升,T细胞数量明显下降;Th细胞与CTL细胞数量也下降,但CTL下降更明显。说明在注入外来抗原后,小鼠发生免疫应答,且主要为体液免疫应答。
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发表于 2024-9-20 23:15 | 显示全部楼层
不知道你的这个问题是否有了答案,作为入行流式的技术,我帮你回答吧,流式的应用可以是:1.细胞表面标志的检测:细胞免疫表型分析、其它表面蛋白分析等。
2.细胞内蛋白的检测:细胞因子、细胞骨架分子和胞质酶类等。
3.细胞内离子浓度检测:H+、Na+、K+、Ca2+等。
4.细胞核成分检测:细胞周期、DNA总量分析等。
5.细胞膜:流动性、膜电位、膜通透性等。
6.细胞功能:如细胞死活判定、pH值、增殖与凋亡、抗药性等。
7.基因表达:内源及外源基因表达,荧光报告基因的表达和转染效率判定。
8.细胞分选:可同时进行2路或4路分选以及细胞克隆、成分分选等特殊分选。
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