NGS丨学习回顾：磁珠法核酸提取试剂开发原理与难点

磁珠法（磁性纳米颗粒吸附法）的核心是生物磁珠，生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶向物质。

具体而言，磁珠（即磁性纳米颗粒）通常以表面富含带正电荷化学基团的FeSO2或Fe3SO4制备。

在经过裂解的混合液中加入磁珠，当液体环境为偏酸性(PH5.0)时，游离的DNA分子被吸附到磁珠上。

此时利用磁场将磁珠固定，将磁珠与液体分离而弃除杂质，同时反复洗涤多次，可除去磁珠表面附着的其他物质。

在洗涤后的磁珠中加入偏碱性(PH8.0)的TE缓冲液(Tris-EDTA
buffer solution)或磷酸缓冲液(Phosphate
Buffer，PB)中，即可将磁珠与DNA分离，从而得到纯化的基因组DNA溶液。

磁珠法核酸提取试剂开发难点

1.前处理问题：

1.1石蜡提取试剂盒开发策略：去交联-不用二甲苯/不同组织类型的兼容性/微量穿刺样本的处理。

1.2组织样本提取试剂盒开发策略：样本兼容性/样本前处理过程的高效率。

1.3粪便样本提取试剂盒开发策略：去除样本中的蛋白质、细胞碎片等杂质/高效破壁/区分脱落细胞和粪便微生物。

1.4 痰液样本提取试剂盒开发策略：快速前处理工艺/生物安全性。

1.5土壤样本提取试剂盒开发策略：去除土壤中的腐殖酸、多糖等杂质/消化液第一步灭活微生物，避免感染性物质扩散。

1.6 干血斑/法医/植物/低丰度样本。。。

2.提取过程：

2.1 生物安全性：尽量确保提取环境密闭，降低交叉污染。

2.2 绿色工艺：不使用有机试剂。

2.3 提取效率：快速、高效、可重复。

2.4 自动化适配度：样本量和通量的适配性，提取工艺过程编程验证。

2.5 质控指标：过程质控和结果质控。

3.提取后处理：

3.1 样本短期和长期保存:
RNA易降解，合适的保存管。

3.2 样本溯源：减少人为错误。

3.3 样本下游实验验证：反向指导提取试剂盒开发，精密度、准确性验证。

分享嘉宾介绍——林佳辉

各位朋友大家好，我是林佳辉，目前定居嘉兴，担任医脉赛科技市场经理和总经理助理。目前负责全国磁珠产品、提取试剂和自动化设备的市场工作。主要对接长三角分子领域终端客户：高校、科研、疾控、企业等。

我本科和硕士都是在南京工业大学，生物工程和微生物专业，毕业后也从事了三年的研发工作，在积累了一定研发经验后，深度思考了自己的能力定位，希望通过研发转市场的角色转变，能将自己的专业知识，服务好更多的客户，交到更多志同道合的朋友。自我定位是深耕生命科学行业，能在生命科学的江湖中，发光发热，为产业发展添砖加瓦。目前的我负责的市场方向是分子流水线，期待能遇到在这方面有共同需求和理念的朋友深度交流。

医脉赛科技于2010年成立于上海张江，是一家专注于纳米磁珠技术的高科技生物技术企业。医脉赛科技拥有中国、美国双研发基地，具备完善的试剂与仪器制造生产车间和专业团队，总面积超5000平米。公司以“ 系列纯化富集设备+ 提取纯化试剂”为主营产品，覆盖核酸检测、蛋白纯化、化学发光、细胞分选等专业领域，为客户提供“超高灵敏度、高通量、自动化检测解决方案”；在病原体检测、肿瘤筛查、精准医疗、科研应用等市场，已服务于疾控、医疗系统500余家长期客户，产品远销至北美、欧洲、和中东。公司使命是：成为高品质纳米磁珠应用和整体解决方案践行者，服务生命科学，服务人类健康。