近日，知微生物发布公告，称其自主研发的“结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒（荧光PCR法）”于2024年10月24日获国家药品监督管理局（NMPA）颁发的第Ⅲ类医疗器械注册证，注册证号：国械注准20243402119。截止目前，这是国内上市的真正意义上的第4款结核分子POCT试剂盒，也是国产第2款结核分子POCT试剂盒，这款产品的上市，从一定程度上也代表了国产分子POCT试剂盒在非病毒检测领域上取得重大进步。从公布的信息来看，知微的这款产品主要检测结核分枝杆菌复合群，采用磁珠法提取及qPCR的“金标准”方法学、20 CFU/mL的最低检出限、1分钟的快速样本前处理，“样本进、结果出”的简便操作、45分钟的快速检测。
这里有三个黑科技蛮不错的，第一个是检出限做到了20CFU，接近国际一线水平，第二个是1min的快速样本前处理，虽然单独配了台仪器，但是样本处理效率大大提升；第三个是45min的快速检测，这对于结核检测来讲，是目前最快的检测产品。结核领域因其特殊性，一直是分子POCT产品的目标市场之一，但因为结核分枝杆菌的难破壁和耐药问题，导至开发此类产品的技术难度一直很高。
截止目前国内获批的真正意义上能够做到“样本进，结果出”全封闭体系的产品也仅有3款： （1）赛沛—结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒（实时荧光PCR法）MTB/RIF Assay Xpert MTB/RIF以半巢式实时荧光定量PCR为基础，以包含81-bp核心区域的rpoB基因序列为靶基因设计一对rpoB的正向和反向引物，设计5条TaqMan探针覆盖81-bp核心区域以检测是否存在结核分枝杆菌及该区域是否发生突变，每个探针用不同的荧光染料标记，允许同时检测，以推测利福平的耐药情况。 PCR所需的引物、探针、dNTPs、电解质、牛血清白蛋白和赋形剂等是以冻干珠形式存在。检测试剂盒以冻干的球芽杆菌作为样本处理质控（SPC），用于确认目标细菌的充分处理和监测是否有PCR反应抑制物质的存在。探针检查质控（PCC）用于确认试剂再水合、检测匣中PCR管加样、探针完整性和染料稳定性。 （2）赛沛—结核分枝杆菌和利福平耐药基因检测试剂盒（实时荧光PCR-熔解曲线法）Xpert® MTB/RIF Ultra 2017年3月，WHO推荐使用新一代的检测方法Xpert Ultra替代Xpert，旨在提高检测敏感度。与Xpert相比，Xpert Ultra检测技术的PCR扩增体系由原来的25 μl增加至50 μl，并且在Xpert检测单个ropB目的基因的基础上增加检测2种多拷贝序列IS6110和IS1081。这些技术的改进使Xpert Ultra对MTB的检出下限由原来的112.6 CFU/ml下降为15.6 CFU/ml，与Xpert相比敏感度提高了7倍。此外，Xpert Ultra检测原理由半定量半巢式循环阈值比较变为半定量巢式PCR，并采用了高分辨率熔解曲线技术。重新设计了ropB基因的分子信标，提高了利福平耐药相关第553位密码子突变检测能力，以及使Q513Q、F514F沉默突变与其他利福平耐药相关的决定区域的突变得以区分，从而更好地区分ropB突变种类及在混合感染时检测利福平耐药情况。Xpert Ultra检测技术的另一个优势是检测时间明显缩短，报阳和报阴时间由Xpert的110 min分别缩短至77 min和66 min，从而有利于患者的快速诊断和及时采取治疗措施。（3）优思达—结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒（恒温扩增-实时荧光法）试剂盒适用于体外定性检测人痰液样本中的结核分枝杆菌复合群(MTC)脱氧核糖核酸(DNA)，用于肺结核的辅助诊断。采用交叉引物恒温扩增技术(Cross Priming Amplification,CPA)检测结核分枝杆菌复合群特异性的IS6110插入序列。其反应体系通过 6 条特异性扩增引物、1条特异性荧光探针以及具有高活性的链置换特性的 DNA聚合酶，在恒定温度条件下，一次性完成结核分枝杆菌复合群 IS6110片段的特异扩增过程，荧光信号被适配仪器探测到并自动生成实时荧光曲线。其中，玻璃化保存技术实现了试剂盒的常温运输。
参考资料：知微生物、药监局官网、赛沛官网、优思达官网、防痨杂志等
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