PubMed关键词SiMoA检索文章数量超过600篇（截至20230731） 1. 什么是单分子免疫检测 我用自己的理解转化成大白话，一堆1元硬币里面找一个5角的硬币，简单的办法是铺平，使5角硬币暴露出来。 同样一堆分子里面找一个待检测物，把分子铺成单层，也容易找到。 常用的方法有： 多孔芯片，每个孔落一个分子。 扁片芯片，液体流过自发成单层。 薄反应杯，液体落进去成竖向单层。 也有报道利用纳米孔检测蛋白分子，液滴类的dPCR用的比较多，但还未见商品化。 2. 国外单分子免疫检测厂家 Quanterix公司的SiMoA （single molecule array）
Quanterix的产品线
HD-1与HD-X性能比较 SiMoA技术是基于微阵列芯片的单分子免疫检测，是在毫米级芯片上雕刻（或浇筑）成千上万个微米级微井，每个微井体积约 40 fl 左右，随后将免疫复合物磁珠分配于微井中，再借助高分辨率荧光显微镜对荧光点进行计数，依据泊松分布理论，计算同时含珠子与荧光产物孔的数量/含珠子孔总数的比值，以此确定测试样品中的蛋白质浓度。
SimoA 原理图
SiMoA通过磁珠酶联免疫反应与微孔阵列芯片的结合，实现单分子蛋白检测。其操作流程如上图 （1）利用表面标记有捕获抗体的磁珠捕获样品中的抗原； （2）使用biotin标记的检测抗体对被捕获的抗原进行标记； （3）加入链霉亲和素—半乳糖苷酶复合物，与检测抗体上的biotin结合； （4）将反应洗净后的磁珠与底物混合，加载到含有微孔阵列的检测芯片中，利用磁场使磁珠落入与其尺寸完全匹配的微孔中（3μm左右），加入油相，使得微孔之间物理隔离； （5）含有半乳糖苷酶的微孔由于酶分子催化底物产生荧光产物； （6）对微孔阵列进行荧光成像，通过对发出荧光信号的微孔个数对照标准曲线来实现定量检测。 SiMoA系统存在很明显的一些缺点： （1）检测操作流程过于繁琐复杂。 （2）SiMoA系统使用的盘式微流控芯片加工精度高，生产成本高昂。 （3）SiMoA检测系统单次检测耗时长达1小时以上，远超过目前免疫诊断市场中已经能轻易实现的15分钟报告时间。 默克 SMC™单分子免疫检测平台 Singulex公司成立于2003年，致力于单分子水平检测技术（SMC）的开发。 公司于2006年提交SMC核心专利，并于2011年前后正式推出第一代单分子免疫检测设备Errena，以流式形式扫描通过微米级检测窗口的单分子荧光信号以实现单分子水平生物标志物的检测。因其超高灵敏度水平的检测性能，Errena系统面世后即受到生命科学领域的广泛关注。 2015年，Merck Millipore收购Singulex公司SMC技术在生命科学领域业务。 2016年1月，Singulex公司获得德国Qiagen公司5000万美元投资稀释20%股权。 2017年，Merck推出SMC新一代科研级产品SMCxPro，以解决Errena系统不稳定和假阳性问题。同年初Singulex公司推出全自动SMC检测平台Clarity并寻求合伙人以完成Clarity在FDA注册工作，并于年末公告提交Clarity设备和超敏肌钙蛋白（是的，你没看错）检测项目的510（k）申请。 遗憾的是直到2019年年中，Singulex在获得合计2.27亿美元融资后，依然没有获得FDA批准，正式于6月倒闭。
仪器及原理图
原理图 merck官网视频 Fluxus公司
Mecwins公司
23年官网晒出与菲鹏合作参观照片
3. 国内单分子免疫检测厂家
宇测仪器平台全家福 产品视频 技术上利用流通池进行单层化，并利用拍照方式进行光检测 看严总的介绍， 耗材非常少，只有反应杯。反应池可以通用复用，同级别平台成本大幅领先。 高速机型达到200t/h速度，速度够快。 对于市场和临床的认识远超其他玩家，不断解决临床问题，态度严谨专业。 之前提到AD检测不同于其他组合，中国走在了世界前列，宇测有希望能将AD血液检测赛道提升到新高度。 中科先见
数字化单分子检测系统 芯弃疾®JX-1G 技术上来说是落孔，但是有意思的是流体控制，看视频是芯片倾斜加液体，自发流动入孔。 来源于IVD工具人2022年6月3日直播回放 光与生物
DFZ-2000全自动单分子免疫分析仪（20t/h）
DFZ-1000半自动单分子免疫分析仪
“先行者”POCT单分子免疫分析仪
LyMedivh™ AXL-2000
自动化单分子免疫检测仪
单分子免疫检测设备 技术上可以看是落孔技术，参数标注了3min一个样本2-6个测试，速度也是非常快。不知道样本制备步骤是全系标配还是特定仪器。
官方公众号及文献公开资料截图 聚拓生物 杭州聚拓生物科技有限公司（简称“聚拓生物”）创立于2021年，总部位于浙江杭州，是中国领先的分析仪器公司——聚光科技集团的成员企业，专注于生命科学实验室分析仪器的研发、生产和推广。聚拓生物拥有毛细管电泳、微流控芯片和精密光学检测等分析技术平台，致力于为临床诊断、药物研发、生物技术研究等领域的用户提供先进、稳定、灵活、可靠的分析检测产品和系列解决方案，提高实验效率、促进科技发展，为人类健康事业贡献力量。
SimFlo 1000全自动单分子荧光免疫分析仪单分子免疫仪是具有独立自主知识产权的新一代超敏蛋白定量设备。和传统免疫检测方法的“模拟”定量方式不同，单分子免疫采用“数字化”检测的原理，其检测灵敏度超过传统免疫检测方法1000倍，被誉为是下一代的免疫分析技术。SimFlo 1000采用创新的流式荧光检测技术路线，实现了稳定可靠的超灵敏蛋白定量，且能够连续进样、符合常规操作习惯。该产品可应用于神经系统疾病、肿瘤和感染等领域的新型标志物发现和检测，也可应用于药物PK/PD分析等领域 聚光科技（杭州）股份有限公司（简称“聚光科技”）自2006年起组建高端质谱团队；2020年布局生命科学领域，成立杭州谱聚医疗科技有限公司（简称“谱聚医疗”）、杭州谱康医学科技有限公司（简称“谱康医学”）；2021年成立杭州聚拓生物科技有限公司（简称“聚拓生物”）、杭州聚致生物科技有限公司（简称“聚致生物”），全面拓展生命科学与诊断新赛道。现聚光科技生命科学板块旗下子品牌正式发布全新视觉识别系统。 瑞芯智造（深圳）
国研汉因
灵敏度达到10fg/ml、线性范围 10fg/ml-1ng/ml、R2值达到99.80%，检测时间5-10分钟、通量1-16T、流动式检测、支持插样、CV小于3% 合肥国研汉因检测科技有限公司是一家以数字化免疫技术为基础核心，专注分子诊断，聚焦新代单分子免疫检测技术在病原微生物检测、肿瘤液体活检、神经退行性疾病等领域革新应用的创新型高科技公司。 公司核心团队由来自英国伦敦帝国理工、中国科技大学、香港科技大学等国内外知名学府与研究机构的博士和博士后组成，在半导体、生物传感器、生物芯片、微流控技术、集成电路和生物信息等领域具有十年以上研发经验，拥有深厚的技术积累和创新成果，具有强大的研发、运营和商业化落地能力。 基于数字免疫分析及分子诊断核心技术，国研汉因开发的全新一代单分子免疫检测技术实现了低丰度蛋白超高灵敏度的绝对定量分析。 4. 国内注册证情况 各厂家拿证策略上看出各家主推方向（统计时间截止到20230801）
5. 其它值得关注的相关技术 SiMPull SiMPull（single molecule pull-down ）约翰·霍普金斯大学及类似的单分子增强捕获（single-molecule augmented capture，SMAC）
主要是利用载玻片（玻璃）表面用mPEG钝化，连接链霉亲和素和生物素化的抗体，捕获待检测物，发光可用荧光蛋白，荧光素等。
纳米孔微量检测技术平台 纳米孔测蛋白含量发表的比较新论文，简述了技术原理，是否有产业化公司，待查。
检测步骤简单介绍
在检测时，流星型核酸链P1和P2通过纳米孔电信号间隔大，哑铃型核酸链DB通过纳米孔信号间隔小，结合检测到的电信号变化和加入核酸链浓度可以计算得到待检测物质浓度。 液滴微量检测技术平台 文献称为ddELISA
ddELISA是一种基于微珠的数字免疫分析方法，将珠子分离到pl大小的液滴中，然后装入一个腔室，形成液滴阵列，用于分析。更具体地说，将抗体包覆的顺磁珠添加到含有目标分子的样品中。然后用生物素化检测抗体和链霉亲和素-β-半乳糖苷酶（SβG）标记目标分子，形成一个酶标记的免疫复合物。然后将珠子重悬在小体积（2ul）的底物中，荧光素二-β-D-半乳糖糖苷（FDG），混合物被分割成pL液滴，这样大多数液滴没有珠，一小部分有一个珠。然后，这些液滴被装入一个单层的腔室中，形成液滴阵列。通过三个通道的图像来识别i)液滴，ii)珠子，iii)荧光产物，从而识别“液滴上”。信号输出是用每颗珠的平均酶的单位（AEB）来测量的。（机翻） 流式单分子检测技术 学习了流式细胞大会上，孟总报告，提到流式细胞也能应用于单分子免疫检测。详见报告ppt
6. 目前单分子免疫技术平台体验 （没实地调研，数据都是推测，体验来源于专业人士分享） 样本检测时间，可以快，但目前没有发光快。 急诊，大部分项目不需要急诊。 通量，可以做大，200测试/小时已经达到。 检测范围，轻松超过4个log，如能测0.1-超过1000pg/ml。 精密度，看simoa批内批间cv约6%左右，分项目，低端cv估计不好。 耗材，有的做成一次性耗材，有的做成复用耗材。 进样、联机、定标。均可复用免疫检测自动化模块。 故障，上市一年属于磨合期，故障高点也正常，相信故障率能控制好。 单机产出， 以阿尔茨海默病血液检测指标为例，1个收费400元/项左右，成本算他30元/测试（含耗材）卖100元/测试，（数据纯拍未找到依据）一天5个样本，每样本测3个项目（3项1200，和ct比还是很有优势，即使测3项翻一倍也便宜很多）。 未来成本降低一半，售价降低一半（由于有大量竞争）标本量和测试项目增加1倍。 目前单产=（100元-30元）*5样本*3项目*22天*12个月=83.2万元/年 未来单产=（50元-15元）*10样本*6项目*22天*12个月=55.4万元/年 单台成本 已知simoa仪器卖150万/台，国产这方面干到售价50万元，毛利20%左右应该问题不大。即成本40万仪器成本。 数据基本都是拍的只有收费是准的，如果有幸拍的差不多，至少可以看出有钱赚，回收期还好是个不错的生意。 7.未来的选择 产品形态及耗材 基于个人粗浅的认识，一旦用上了微流控技术，联检的能力增加，但一次性耗材可能增加，单测试成本会上升。 如果将仪器平台按工作流程的顺序分为， 1样本处理运输、 2耗材辅助试剂运输、 3免疫反应、 4发光检测。 123但凡两项以上整合在一起这个装置大概率是芯片耗材，成本高。 听说SiMoA仪器要150万（不准的话，可以加好友告诉我一下），还配套进口芯片。系统和试剂耗材成本可以说是SiMoA一大短板。国产企业想赚大钱建议考虑一下从设计上降低成本，挺近临床。 也就是说能用成熟的装置就用，能用管子、池子，就不用芯片、杯子。 生产工具还是名声工程 单分子免疫目前还是科研为主，毕竟低丰度的标志物，先要发现才能进入临床。目前SiMoA也大多是在科研用途，现阶段要想赚到钱，单分子免疫后来者，尤其是国产玩家，势必还要挤科研市场，做名声工程后来者在文献、标杆、成本上不占优势。参考测序初期国产玩家也没赢到多少份额。 活下去的重点还是要把单分子免疫产品作为生产工具，设计思路上要从研发“金铲子”变为“拖拉机”，具备稳定、快速、便宜、便捷。 通用机型还是科研临床分开 科研和临床的需求区别很大，临床重检出，重视单次结果，反倒不看重精密度。结合临床生产工具的稳、快、便宜、便捷的特点，很难用通用机型满足不同需求。大方向还是科研平台和临床平台分开研发，也看到宇测为例已经按照这个思路进行产品设计。 兼容共济还是特立独行 特立独行指，做低丰度标志物如阿尔茨海默病血液标志物，眼科房水标志物等。 兼容共济指，做低丰度标志物，也做甲功激素肿瘤等。 单分子灵敏度高，也牺牲了一些其他性能。要不要兼容甲功激素肿瘤这些不太要求灵敏度的常规项目。前几条讨论了产品形态，和活下去的方向，都支持未来要做一款服务临床的仪器，能够检测临床需要的更多低丰度标志物。 但在现在缺乏低丰度标志物的情况下，活下去又涉及到要不要做低丰度以外的其他标志物。 现阶段免疫检测情况是，发光满足大部分标志物、客户认可、价格低甚至集采、速度快，重复性好。看起来单分子平台完全不占优势。但不做这些有可能做不大，或者速度不够快，最后被收购。矛盾突出。 个人建议，要保留兼顾低丰度和常规项目的能力。 在落孔or变为单层之前和发光原理上一样，是否能在仪器设计上将落孔or单层化之前与发光复用，常规项目直接转移至PMT检测、单分子的项目转移至CMOS拍照。常规项目降低操作时间和要求，提高常规项目竞争力。 另一点，是否分子和免疫做成一体机，前期调研发现，技术上不存在限制，主要还是检测实验室，已经形成了分子室免疫室的区分，不需要同机联检分子免疫。要想改变用户的要求和标准，除非干掉现有其他所有分子检测平台，个人认为很难办到。 小而美还是大而全 单分子免疫未来是坚持单机，还是更加自动化接入流水线。 我认为要看公司选择的道路。 进入常规检测领域带来的限制更多，对产品和服务提出的要求也更多，最终能否独立活下去，不仅靠自身实力也看政策和机遇。 但至少小而美这条路可以走很长一段时间，比如坚持单机测一些几pg/mL的项目，其他方法学无法稳定检出，单分子免疫可以坚持到新方法学出现。 几个选择题个人拙见
如果有两种之外的选项，则至少能开拓思路，欢迎交流。
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