浅聊磁珠法核酸提取的“秘密”

（1）核酸：脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）的总称，是由核苷酸按一定排列顺序组合而成的生物大分子，是生物体的遗传物质，起存储遗传信息和指导蛋白质合成作用。

1、煮沸法：加热裂解细胞，释放核酸溶解在液体中，高速离心分离杂质；

2、酚-氯仿法：有机溶剂处理破碎组织或细胞，核酸溶解在水相，脂类溶解在有机物中，蛋白在中间层，以此分离核酸。

3、离心柱法：通过离心让硅基质吸附核酸，高盐低pH结合核酸、低盐高pH洗脱核酸。

4、磁珠法：利用超顺磁珠高效吸附胍盐条件下释放出来的核酸，在外加磁场情况下与杂质快速分离，便于自动化操作。

1、咽拭子灭活振荡/洗脱、组织切片消化、粪便清洗、痰液液化、细菌破壁等。

2、强变性环境中，细胞膜、病毒外壳被破坏，释放出内部的核酸，并被磁珠吸附

3、适宜的缓冲体系中，去除吸附在磁珠表明的杂质、洗脱核酸。

样本预处理（针对样本）：咽拭子振荡、组织切片消化、粪便清洗、痰液液化、细菌破壁等。

裂解：在胍盐、表面活性剂等强变性环境中，细胞膜、病毒外壳被破坏，释放出内部的核酸，并被磁珠吸附。

洗涤：在适宜的缓冲体系中，去除吸附在磁珠表明的杂质如糖蛋白、胍盐、脂类、酒精、肝素等。

洗脱：将磁珠上吸附的核酸洗脱下来与磁珠分离。

磁珠的组成成分主要有内层的高分子材料、中间层的金属氧化物和外层的功能基团。内层常用的高分子材料有聚苯乙烯、聚氯乙烯和聚乙烯亚胺，中间层的金属氧化物主要是Fe3O4、外层的基团主要有羟基、羧基、氨基等。随着磁珠不断的优化和发展，目前主流的磁珠结构为，内层为聚苯乙烯、中间层为Fe3O4，外层为功能基团，其中功能基团固定在SiO2上。

核酸这种构象的改变，与片段长短也有一定关系。核酸片段越长，表面裸露的带负电的磷酸基团越多，更容易吸附到磁珠，只需要较低浓度的PEG和Na+就能有较高的得率。核酸片段越短，则需要更高浓度的PEG和Na+将其表面的水化层破坏，以裸露出较多带负电的磷酸基团，以便于磁珠吸附。利用这一特性，通过调节磁珠工作液（PEG和Na+）与核酸样本的体积比，则可以达到片段筛选的目的。而硅基磁珠则没有此效应。值得注意的是，片段筛选只能用于双链DNA，因为RNA和单链DNA二级结构比较复杂，片段长度与裸露的磷酸基团相关性不强，无法像DNA那样进行片段筛选。