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技术|如何选择合适的单细胞测序方法

2022-5-27 17:38| 编辑: 归去来兮| 查看: 1301| 评论: 0|来源: 诊断科学

摘要: 了解这些可以帮助你确定最适合你研究目标的单细胞测序平台。


1、考虑你的目标


多样性是生活的调味品,但要挖掘所有你可以使用的学术和商业上的单细胞测序方法,似乎令人生畏。在本文中,我们将帮助你对一些选择进行分类。了解每种方法在产量、洞察力的深度、仪器要求和动手实验方面提供了什么将是很重要的。了解这些可以帮助你确定最适合你研究目标的单细胞测序平台。


2、不同的单细胞测序方法


目前可用的单细胞测序技术的阵容在几个主要方面彼此不同。首先是用于将单细胞分割成含有微反应的物理平台。这是单个细胞内容被释放的空间,转录物或其他生物分析物被标记为下游识别,或被索引。如何进行索引是现有技术之间的另一个主要区别,正如生成可测序文库的工作流程步骤一样。


这里有太多的方法,所以我们想重点总结一下当今研究人员使用的四种最流行的单细胞测序平台。


3、了解过程


这些强大的测序方法都有各自的优势。然而,选择适合你的方法还要归结于不能总是反映在纸上的品质。从经验上看,进行实验是什么样的?涉及多少个步骤?这些步骤有多复杂,或者它们是否容易引入错误?我在实验或数据分析中的潜在停顿点是否得到支持?


当你继续权衡每种方法的各种成本和效益时,重要的是要考虑到对你的样品、你自己的时间或人力资源、你的机构等来说什么是可行的。什么技术能最适合你的生物问题和你的实验野心的范围?这些考虑将有助于确保你能做出一个你最终满意的明智决定。


4、需要考虑的问题


1. 我想回答什么科学问题?


2. 我可以用我的现有样本做什么?

a. 样品类型和处理

b. 细胞的数量

c. 细胞与细胞核


3. 我的实验需要多少个细胞和复制?

a. 细胞产量

b. 规模


4. 我的资源或财政限制是什么?


5. 什么实验最适合我目前的工作流程和过程?


如果你想继续探索这些测序方法之间的差异,包括相对性能,可以先从下面的评论文章开始阅读:


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参考文献

[1]       Ashton J, et al. Comparative analysis of single-cell RNA sequencing platforms and methods. bioRxiv (2020).

[2]       Haque A, et al. A practical guide to single-cell RNA sequencing for biomedical research and clinical applications. Genome Medicine 9: 75 (2017).

[3]       Ding J, et al. Systematic comparison of single-cell and single-nucleus RNA-sequencing methods. Nat Biotechnol 38: 737–746 (2020).、

[4]       Mereu E, et al. Benchmarking single-cell RNA- sequencing protocols for cell atlas projects. Nat Biotechnol 38: 747–755 (2020).


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