实时荧光PCR法的质控要求及评价指标

阳性对照（PC）：监控系统故障，一般为含目的成分或片段的质粒。

阴性对照（NC）：监控反应体系污染情况，一般为不含目的成分或片段的质粒。

无模板对照（NTC）：监控反应体系污染情况，一般为去离子水。

内标（内参）：校准生物学误差，判断核酸提取有效性及扩增效率。

重复实验：降低其余误差，一般为2-3次以上。

动物源性检测操作中对内参基因18SrRNA进行检测的方法可在第二通道中进行设置。单通道产品则可在B槽中进行，设置同A槽。 

一般无特殊要求的实验需要设置阴阳性对照，如非洲猪瘟病毒检测（TCVMA 5-2018），食源性致病菌检测等（SNT1870-2016），要求严格的实验还需设置内参并进行2-3个平行实验，如动物源性检测（GB∕T38164-2019），转基因定量实验等（GBT19495.5-2018）。

对于涉及人体样本的临床诊断而言，除质控品设置外，还需对整个核酸提取和PCR扩增过程进行质量控制。如诺如病毒检测（GB 4789.42-2016），新冠病毒检测等。

在实际实验过程中，需综合考虑实验环境、操作流程、实验成本等实际条件，以便选择适宜的方法进行质量控制。

规则：抑制指数<2.00，扩增实验成立，反之，则反应无效。

方法：抑制指数=A6Ct值-A5Ct值，满足条件，则使用A1孔Ct值作为结果；若不满足，则判断A7Ct值-A5Ct值，满足条件后则使用A2孔Ct值作为结果；若两个反应孔抑制指数均≥2.00，则反应无效。（反应结果为阳性时也可酌情判定为阳性）

规则：若核酸提取效率≥1%，则核酸提取有效。若提取效率<1%，则需重新检测（反应结果为阳性时也可酌情判定为阳性）

方法：通过B1-B4孔建立标准曲线（PC2浓度为1）。核酸提取效率=A8孔Ct值对应的浓度×100%。