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普通PCR技术和数字PCR技术,什么区别?

2021-5-11 17:50| 编辑: 归去来兮| 查看: 3234| 评论: 0|来源: IVD学习笔记

摘要: PCR技术自问世以来,在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。按照PCR技术的演进,人们习惯性将PCR技术划分为三代:普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术(qPCR)以及数字PCR(dPCR)技 ...

PCR技术自问世以来,在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。按照PCR技术的演进,人们习惯性将PCR技术划分为三代:普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术(qPCR)以及数字PCR(dPCR)技术。以前也介绍了很多关于qPCR相关知识,这期给大家分享另外两种PCR技术——普通PCR技术和dPCR技术,以期让大家对这些技术有更进一步的认识。




普通PCR



1、什么是PCR




PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)是一种体外核酸扩增系统,其原理类似DNA分子的天然复制过程,是将在待扩增的DN 片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。该技术已成为分子生物学中一种有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。


2、PCR基本原理




PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。该技术是在模板 DNA、引物和 4 种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于 DNA 聚合酶的酶促合反应,将待扩增的 DNA 片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经「高温变性—低温退火 — 引物延伸」三步反应的多次循环,使 DNA 片段在数量上呈指数增加,从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。DNA 的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。


3、PCR反应要素




①DNA模版:可以是双链、单链、提取染色体的DNA、克隆的质粒DNA;②引物:一对寡聚DNA,分别与模板两侧的3’端序列互补,可使DNA序列得到扩增;③DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):催化DNA合成;④缓冲液:提供DNA合成反应所需的PH,离子强度等环境;⑤4种单核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。

注:可以按照比例放大或者缩小体系,不同的PCR反应需要优化;按照实验方案进行即可。


4、普通PCR的优缺点




优点:经典方法,国际和国内标准齐全;仪器试剂成本较低、PCR产物可以回收后做其他分子生物学实验。


缺点:容易污染、操作繁琐、只能定性分析、敏感性中等、存在非特异性扩增,当非特异条带与目的条带大小一样时无法区分。


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