IVD免疫诊断原理一览

免疫诊断（immunodiagnosis）是应用免疫学的理论、技术和方法诊断各种疾病和测定免疫状态。目前免疫诊断的平台和方法有多种多样，但是都基于相同或相似的原理。这里就整理免疫诊断的5大基本原理供大家回顾。

1、双抗体夹心

原理：双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，双抗体夹心法适用于测定拥有至少两个表位的大分子抗原。不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，不能形成两位点夹心。

应用场景：绝大多数检测蛋白都可以使用双抗体夹心法。有些抗体检测项目，如总IgE检测。

注意事宜：1）在一步法，待测抗原与标记抗体一起加入反应中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原会分别和固相包被抗体及标记抗体结合，不会形成“夹心复合物”就出现钩状效应，导至结果偏低或者甚至可出现假阴性结果。2）HAMA效应和类风湿因子（RF）的干扰。

2、双抗原夹心

原理：双抗原夹心法的反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和标记。

有研究表明，双抗原夹心法检测抗体的灵敏度和准确性要抗体检测使用的间接法（检测抗体更为常用的一种方法）。

应用场景：理论上，检测抗体的项目均可使用，如乙肝表面蛋白抗体检测。待检抗体IgG的两个Fab需要分别同固相包被抗原和标记抗原同时结合。

注意事宜：抗原标记过程可能导至蛋白构象变化，需要寻找最适合的标记物和标记方法。

3、间接法

原理：间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用标记的抗抗体，俗称二抗，来检测与固相包被抗原结合的受检抗体。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。

应用场景：所有的IgG抗体检测都可以使用。如新冠血清IgG检测。

注意事宜：本方法的优点是只要变换包被抗原的种类就可利用同一标记抗抗体（二抗）建立检测相应抗体的方法。

4、竞争法

原理：当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个表位供包被和检测抗体同时识别结合，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。由于物质的相互作用或者结合是相对动态平衡的过程，一旦样本中存在待检测物，样品中的待检测物会同试剂中的标记物去竞争结合包被物。这样就是导至原来结合在一起的包被物和标记物分离，使原本饱满的信号值进行降低。信号降低的程度同待检测物的浓度成正相关。

应用场景：小分子抗原或半抗原，如激素检测，雌二醇，睾酮；甲状腺功能检测，T4，T3等。

注意事宜：竞争法中，有些待检测物分子特别小，很难制备或找到适合使用的抗体，而且生理条件下可以同其他蛋白结合，那么可以使用该分子的结合蛋白来代替抗体实现。如，25OH-Vd检测，可使用25OH-Vd特异性抗体，也可使用Vd结合蛋白。

5、捕获法（反向间接法）

原理：捕获包被法，又称为反向间接法，采用抗抗体（二抗）包被，抗原进行标记的检测方法。以目前最常用的IgM测定为例，因血清中针对某种抗原的特异性IgM和IgG同时存在，则后者可干扰IgM的测定。因此先将所有血清IgM（包括异性IgM和非特异性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再测定特异性IgM。

应用场景：IgM测定最为常见，特定过敏原IgE检测。

注意事宜：IgM型类风湿因子（RF）的干扰，IgE型类风湿因子相对较少。