IVD联合检测技术平台&明星产品

谈到免疫诊断，大部分视角都关注化学发光、POCT等热门领域。这种技术平台的发展往往更倾向于解决提高免疫检测的灵敏度、特异性、检测区间、检测速度、检测通量等。但如果从疾病的角度或者检测项目的角度看，人们更愿意提高免疫诊断对疾病的诊断性能，如减少假阳性和假阴性，缩短窗口期等。联合检测是目前最常用也是非常容易想到的解决思路之一。

在之前介绍PSA、HIV，HBV和HCV的过程中，总能看到各种公司利用联合检测提高疾病的诊断性能，如PHI，4KScore，4代试纸条，HBV&HIV联合检测等。这种利用多种标志物以提高检测性能的例子几乎覆盖每一种肿瘤检测、传染病筛查、感染确认等。联合检测有很多特殊的应用场景，甚至是无法回避的场景，如自身免疫疾病检测、过敏原检测等。

试纸条技术，即免疫层析法，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。目前试纸条的标记物形式多样，有胶体金、乳胶颗粒、量子点、荧光物质、上转换颗粒和酶等。

试纸条是POCT最简单，也是应用最广的技术平台，通过加入多种检测线可以实现联合检测的目的。最广为人熟知的就是雅培HIV第四代试纸条，通过同时检测HIV的抗体抗原实现HIV的快速检测，窗口期可缩短为15-20天。

国内POCT企业龙头广州万孚有人类免疫缺陷病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、乙型肝炎病毒表面抗原、梅毒螺旋体抗体联合检测试剂盒，其检测原理就是胶体金法。其主打的应用场景是手术前对患者进行乙肝、丙肝、艾滋病、梅毒的相关病原学检查快速检出“窗口期“患者，为手术方案制定提供检验依据，有效避免医源性感染，保护住院病人及医护人员的安全。

免疫印迹（Western Blot，WB）采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对样品中的蛋白质按照分子量进行分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜，NC）上。固相载体可以吸附蛋白质，并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的NC膜就称为一个印迹（blot），用蛋白溶液（如BSA或脱脂奶粉溶液）封闭处理，封闭NC膜上的非特异结合位点。用目标蛋白的抗体（一抗）孵育NC膜，只有待研究的蛋白质才能与一抗特异结合形成抗原抗体复合物，这样清洗除去未结合的一抗后，只有在目标蛋白上结合一抗。用一抗处理过的NC膜再用标记的二抗孵育，带有标记的二抗与一抗结合形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置，并根据显色或发光的强度进行定量。

国外在这个技术上比较出名的有GE的免疫印迹，自从1990年的第一代应用于免疫印迹技术的增强型化学发光（ECL™）检测试剂—即Amersham™ ECL试剂面世以来，  GE Healthcare的产品手册经历了不断的改进和优化，包括了免疫印迹技术的相关需求，涵盖了从电泳和电转移仪器到高灵敏度的检测系统和软件。

另一项较为出名的是欧蒙的欧蒙印迹法。可能很多人对欧蒙不是特别熟悉，欧蒙是全球非常著名的免疫诊断企业，其拳头产品是自身免疫疾病相关的检测，该系列产品连罗氏等巨头都无法与其竞争。我个人非常喜欢这样的企业，专注某个领域做到极致，是可以在巨头林立的体外诊断市场生存下去并成为一方霸主的。

蛋白芯片属于微阵列芯片的一种。蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片。然后，用标记了特定荧光抗菌素体的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂洗将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到测定各种蛋白质功能的目的。

国内研究该技术比较出名的有上海裕隆生物科技有限公司、上海铭源数康生物芯片有限公司和湖州数康生物科技有限公司。裕隆生物具有强大的多种生物芯片(蛋白芯片、基因芯片、液相芯片、抗体芯片、组织芯片、磁芯片等)开发能力，自主创建了生物芯片载体处理技术、点样技术、标记技术、洗涤技术、检测技术等，并开发了系列化产品。下图是裕隆生物的产品部分截图。

流式荧光技术又称液态芯片技术(Luminex xMAP技术)，其整合了荧光编码微球、激光分析、应用流体学及高速数字信号处理等多项最新科技，是美国Luminex公司于上世纪末开发出的新一代高通量发光检测技术。目前该技术已被广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别等领域，并得到各权威机构和医学界的高度认可。

从免疫诊断看其技术原理，该技术最关键的是以Luminex xMAP荧光编码微球为核心，结合免疫学原理进行抗原抗体反应，通过标记其它荧光分子如藻红蛋白等，运用激光进行荧光信号分析、实现多指标并行检测。因此其技术本身就具有高通量、并行检测的特点。

我国也已有不少厂家将先进的流式荧光技术平台用于临床检验领域高端的体外诊断试剂开发和生产，如国内的透景生命（股票代码：300642）、益善生物及协和洛克等。透景生命也开发出了多种联合检测试剂盒。

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