突破传统桎梏！RT-ERA结合Cas13a 赋能蓝舌病病毒快速现场精准检测

小书虫

发表期刊：《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》
蓝舌病病毒（BTV）作为危害牛羊等反刍动物的烈性传染病原，已在全球除南极洲外的大陆广泛分布，仅欧洲 2023-2024 年就报告超 4.2 万病例，给畜牧业带来重创。我国虽无大规模暴发，但已检出多个血清型抗体，疫情防控压力持续存在。传统检测方法或依赖昂贵设备、或耗时冗长（4-6 小时）、或难以覆盖 36 种 BTV 血清型，严重限制了田间快速筛查需求 —— 而一项创新检测技术的出现，正彻底改变这一现状。

研究团队开发的 RT-ERA/Cas13a 检测系统，将逆转录 - 酶促重组酶扩增（RT-ERA）与 Cas13a 的特异性核酸识别相结合，打造出 “快速、灵敏、特异、可视化” 的一体化解决方案。

整个检测仅需 3 步，无需复杂仪器：

1. 样本处理：采用核酸释放试剂仅需15 分钟快速裂解，更快更准，或 TRIzol 传统提取（30 分钟）；
2. 等温扩增：37℃恒温 20 分钟完成 RT-ERA 扩增，无需复杂仪器的反复升降温；
3. 特异性检测：40℃条件下20 分钟启动 Cas13a 反应，通过三种方式读取结果 —— 荧光值定量、蓝光下可视化荧光、 lateral flow 试纸条（胶体金）肉眼判读。

三大核心优势，碾压传统方法

1. 灵敏度与特异性双高

• 灵敏度：最低可检测 20 个 RNA 拷贝 / 反应，可达实验室级 RT-qPCR，能精准捕捉低病毒载量样本；
• 特异性：对 EHDV、AKAV 等 9 种近缘或常见病原体无交叉反应，避免误诊；
• 血清型全覆盖：通过靶向 BTV 保守基因设计 crRNA，成功检测 30 种已知血清型（含 10 种毒株 + 20 种合成序列），解决血清型多样性监测难题。
  

2. 临床验证表现卓越

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]对 263 份临床样本（80 份阳性 + 183 份阴性）的检测显示：

• 荧光值 / 荧光信号读取：临床灵敏度 100%、特异性 100%，与国标 RT-qPCR 完全吻合；
• 试纸条读取：灵敏度 96%、特异性 100%，满足现场快速筛查需求；
• 田间适配性：采用 NARR 处理粗提样本（无需核酸纯化），灵敏度仍达 97%，特异性100%，即使样本含抑制剂也不影响检测。
  

3. 无需专业设备，田间可直接用
[color=var(--md-box-body-color,var(--md-box-global-text-color))]相比依赖 BSL-3 实验室的病毒分离、需大型机器设备，该方法：

• 无需精密仪器：荧光信号可通过简易蓝光成像设备观察，试纸条直接肉眼判读；
• 样本处理简化：核酸释放剂 5 分钟热变性即可获得粗提液，养殖户或基层兽医均可操作；
• 成本可控：一体化反应流程降低耗材需求，适合大规模田间监测。
  

[color=rgba(0, 0, 0, 0.9)]

关键支撑：先达基因试剂赋能检测突破

该方法的成功落地，离不开先达基因核心试剂的助力。其提供的液体RT-基础型核酸扩增试剂盒（ERA法）[color=var(--md-box-samantha-deep-text-color) !important]和侧向流检测试纸条（CRISPR），成为连接实验室精度与田间实用性的关键桥梁。RT-ERA 试剂实现了逆转录与等温扩增的高效整合，40℃恒温条件下 20 分钟完成靶标放大，为核酸检测提供充足模板。不仅简化了操作流程、缩短了检测时间，更保证了在粗提样本中仍能维持 97% 的高灵敏度和 100% 的特异性，让精准检测在资源有限的养殖场景中成为可能。