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HRP标记 (1) 【试剂准备】 5M 硼氢化氰钠 ；终止液（Quenching Buffer）：3M 乙醇胺，pH9.0；PBS：0.1M 磷酸钠，0.15M氯化钠，pH7.2；Carbonate-Bicarbonate Buffer：0.2 M carbonate-bicarbonate, pH 9.4； (2) 【在pH 9.4 CB溶液中抗体标记】 ① 将1 mg IgG 溶于0.5-1.0mL Carbonate-Bicarbonate Buffer中；取1mg HRP 溶于100uL 超纯水中，并加入IgG溶液，混合均匀后，室温孵育1h； ② 在通风橱中，加入10uL硼氢化氰钠，室温反应15min； ③ 加入20uL终止液，室温反应15min，终止反应； ④ 脱盐柱纯化HRP-IgG； ⑤ 4℃储存4周；若长期储存，加入10mg/mL BSA，适量甘油，-20℃储存； (3) 【在pH 7.2 PBS溶液中抗体标记】 ① 将1 mg IgG 溶于0.5-1.0mL PBS中；取1mg HRP 溶于100uL 超纯水，并加入IgG溶液中，混合均匀； ② 在通风橱中，加入10uL硼氢化氰钠，室温孵育1h； ③ 加入20uL终止液，室温反应15min，终止反应； ④ 脱盐柱纯化HRP-IgG； ⑤ 4℃储存4周；若长期储存，加入10mg/mL BSA，适量甘油，-20℃储存； 注：在pH 9.4 的CB溶液中标记抗体的效率比在pH 7.2 PBS溶液中高。 | 
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雷达卡
发表于 2013-4-19 17:53
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