胶体金尿液Aβ检测试剂效果如何？

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胶体金尿液检测Aβ，迎来多中心证据



q2、IF=3.1 《J Alzheimers Dis》原文链接：10.1177_13872877251352213(科研通http://-ablesci.com).pdf
研究背景与目标​
​问题​：当前诊断方法难以早期预测痴呆，且脑脊液和血液生物标志物检测复杂、成本高。
​目标​：开发基于尿液的非侵入性筛查工具，通过检测淀粉样前体蛋白（AβPP）片段，识别痴呆高风险人群（如轻度认知障碍/MCI和阿尔茨海默病/AD患者），实现早期干预。
研究方法​
​样本来源​：
中国江苏、成都和澳大利亚AIBL队列，共覆盖5,193名参与者（包括认知正常者/CN、MCI和AD患者）。
严格排除肾功能异常、中枢神经系统疾病等干扰因素。
​技术流程​：
​Western blotting​：使用多种抗体（W0-2、aducanumab、22C11、Ab369）检测尿液中AβPP片段（14kDa、28kDa、56kDa、68kDa等）。
​质谱分析​：免疫沉淀后鉴定片段序列（如LVFFAEDVGSNK和WYFDVTEGK），确认来源于AβPP。
​侧向流动免疫层析装置​：胶体金纳米颗粒结合抗Aβ抗体和吞噬促进肽（PPPs），开发快速定性试纸条（专利LU101972）。应用乾康产品
验证指标：检测限（0.7 ng/mL）、重复性、干扰物耐受性（肌酐、葡萄糖等），并通过Aβ-PET和脑脊液ELISA对比验证。

关键结果
AβPP片段在尿液中的存在与差异：

• AD和额颞叶痴呆（FTD）患者尿液中14kDa、28kDa、56kDa和68kDa片段显著高于认知正常者（CN）。
  
• Western blotting结果：
  
  
  图1. 通过抗Aβ单克隆抗体(W0-2克隆株)进行蛋白质印迹检测的尿液AβPP片段。
  
  
  
  • 28kDa条带：在所有样本中均检测到，但在AD和FTD患者中信号显著更强（表明患者组Aβ片段表达升高）。CN组信号较弱，提示其作为疾病标志物的潜力。
    
  • 14-16kDa条带：仅在部分AD和FTD患者中出现，未在CN组中检测到，这可能对应APP的C端片段（如CTF99）。
    
  • 方法比较：冻干浓缩和TCA/丙酮沉淀结果一致，表明浓缩方法不影响检测可靠性，支持尿液样本的稳定性。
    
  
  

图2. 使用阿杜卡努单抗检测尿液AβPP片段。

• 28kDa和14-16kDa条带：与图1一致，在AD和FTD患者中信号更强，但在CN中微弱。
  
• 新增片段：检测到56kDa和68kDa条带，这些在AD和FTD患者中明显存在，而在CN中几乎不可见。68kDa条带可能与APP的可溶性片段相关。
  
• 方法一致性：冻干和TCA沉淀结果无显著差异，再次证实检测稳定性。Aducanumab的敏感性高于W0-2，能捕获更多疾病相关寡聚体。
  

图3：使用抗APP抗体检测尿液APP片段

• N端抗体（22C11）结果：检测到28kDa和56kDa条带，在AD和FTD患者中显著强于CN组。56kDa条带对应APP的可溶性片段（如sAPPα），可能与神经保护机制相关。
  
• C端抗体（Ab369）结果：检测到16kDa（CTF99）和14kDa（CTF83）条带，在AD和FTD患者中高表达，其中一个FTD患者显示极强信号。CN组中这些片段微弱或缺席。
  
• 全长度APP：约105kDa条带在所有组中零星出现，表明APP完整形式在尿液中较少。
  

图4: 通过SDS-PAGE提取的不同条带中已鉴定肽段的质量谱图。

• 4kDa、7kDa和28kDa条带：检测到肽段 **LVFFAEDVGSNK**（匹配APP₆₉₅第613-624位）。
  
  
  
  • 生物学意义：该序列位于Aβ₁₋₄₂内部（Aβ第17-28位），证实这些条带为Aβ相关片段。
    
  • 质谱证据：基峰（m/z 706.85, [M+2H]²⁺）及匹配的b/y离子（见表）。
    
  
  
• 68kDa条带：检测到肽段 **WYFDVTEGK**（匹配APP₇₅₁/₇₇₀第307-315位）。
  
  
  
  • 生物学意义：位于APP可溶性结构域（sAPPα），与神经保护功能相关。
    
  • 质谱证据：基峰（m/z 574.77, [M+2H]²⁺）及匹配片段离子（见表）。
    
  
  
• **LVFFAEDVGSNK**：E值1×10⁻⁶（极显著），覆盖Aβ关键疏水核心区域（LVFFA）。
  
• **WYFDVTEGK**：E值1×10⁻⁵（高度显著），属于APP肝素结合域，调控细胞黏附。
  

1. 江苏队列（社区筛查，n=4,418）

<hr/>2. 成都队列（诊断效能验证，n=440）

<hr/>3. AIBL队列（早期筛查潜力，n=367）

<hr/>

文章重要价值

作为尿检胶体金试剂，性能满足尿液中Aβ检测要求，操作便捷能够用于人群筛查，筛查效果好，成本是PET-CT的1/50。诊断价值符合预期。

以后别再问条子能不能测AD了，事实证明可以。

有意思的发现

1、尿液正常就含Aβ「7」，4月龄APP/PS1基因改造小鼠，尿蛋白组学显著区别于正常组「51」，提示尿液检测有研究基础，只提到一篇尿液Aβ，创新性十足；

2、2023年6-11月江苏筛了26000例大于65岁人群，用了诺唯赞血检Aβ和乾康尿检Aβ。这么多人筛查是个什么项目，诺唯赞估计也要发文章了


之前已经看到乾康一篇poster
Alzheimer s  Dementia - 2023 - Gu - Fragments of Amyloid Precursor Protein in Urine Are Novel and Practical Biomarkers for.pdf
在尿液样本中检测到多个APP相关片段：

• 使用抗APP C端抗体（Ab369）识别出12KD和14KD条带。
  
• 使用W0-2抗体检测到14KD和28KD条带（对应Figure 1）。
  
• 使用Aducanumab抗体（Figure 2）和抗APP N端抗体（22C11）检测到28KD、56KD和68KD条带。
  

fig1



fig2
开发了胶体金试剂，初步验证

• 95%的痴呆患者（AD/FTD）检测阳性。
  
• 90%的轻度认知障碍（MCI）患者阳性。
  
• 85%的主观记忆抱怨（SMC）个体阳性。
  
• 90%的健康儿童检测阴性，显示高特异性。
  
  
• 初步数据：在49例患者中，43例检测阳性（87.7%），而30例对照组中仅有1例阳性（3.3%），进一步证实设备的准确性和特异性。
  
• AIBL队列分析：针对175名AIBL参与者的初步结果显示了设备在MCI筛查中的高敏感性：
  
  
  
  • 总体83.8%的临床诊断MCI（n=37）检测阳性。
    
  • 在Aβ PET扫描阴性的MCI亚组（n=17）中，阳性率高达94.1%，表明设备对早期阶段异常具有强捕捉能力（相关数据见Figure 3）。
    
  
  

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