293T 细胞培养秘籍大公开

生物科研实验室

一、培养条件解析1. 培养基选择：高糖DMEM培养基是293T细胞的理想之选，它能为细胞提供充足能量。同时，需补充10%胎牛血清（FBS）或血清替代物。像我们课题组长期使用XR血清替代物，品控稳定，细胞状态一直保持良好。血清批次差异对细胞状态影响显著，选对血清至关重要。
2. 双抗添加：1%双抗加与不加可视情况而定。我个人培养细胞时选择不加双抗，避免双抗可能带来的潜在影响。
3. 完全培养基配制小窍门：关于500mL培养基配制时是否倒出50mL再加血清的问题，若近期需用无血清培养基，倒出50mL更合适；若无需使用，直接添加50mL血清即可，无需在这类小问题上纠结。
二、应对293T细胞特性的技巧 1. 贴壁性弱与复苏：293T细胞贴壁性较弱，复苏后24小时内务必避免扰动。若使用DMSO冻存细胞，复苏时离心去除冻存液后再转入培养瓶。
2. 换液要点：因其贴壁不紧，换液时动作一定要轻柔，贴着侧壁缓缓添加液体，防止细胞脱落。
3. 传代技巧：当细胞密度达到80 - 90%时进行传代。消化时可不使用PBS清洗，吸干培养基后，向T25培养瓶加入500μL胰酶，转动培养瓶使胰酶均匀分布，室温消化30秒，随后加入完全培养基终止消化，轻轻吹打几十下，过度吹打易致细胞聚团，按1：3传代即可。
4. 冻存策略：T25培养瓶长满后可冻存两管，复苏一管细胞两天就能长满。要注意，293T细胞在密度高且营养不足时易大片脱落，T25培养瓶建议加入6 - 7mL培养基。从培养箱拿出细胞处理时，动作要轻，避免液体大幅晃动。例如在包病毒时，T25长满后分成3份铺到大皿，两天刚好长到70% ，为后续实验提供良好细胞状态。