如何做出符合顶级期刊要求的PCR实验

检验之星

　　聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction,PCR），是用DNA聚合酶在体外对特定的DNA片段进行快速扩增的方法。
　　该方法特异性高、敏感性强、操作简单、快速，不通过活细胞，在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增10~109倍，现已广泛应用到分子生物学研究的各个领域。

　　一、知名期刊PCR实验投稿要求
　　1. Nature系列期刊
　　原文要求："qPCR data must include primer sequences (with validation), amplification efficiency (90–110%), Ct values for all replicates, and MIQE guideline compliance. Normalization must use validated reference genes."
　　来源：Nature Methods Guidelines
　　关键要求：引物序列+验证数据（如BLAST结果）；扩增效率（标准曲线法计算）；遵守MIQE指南；内参基因稳定性报告（如geNorm分析）
　　2. Cell系列期刊
　　原文要求："Provide raw Ct values, melt curves for specificity, primer sequences, and statistical methods. Biological replicates must be clearly stated."
　　来源：Cell Author Instructions
　　关键要求：原始Ct值表格；熔解曲线证明单一峰值；生物重复≥3次（非技术重复）
　　3. Journal of Biological Chemistry (JBC)
　　原文要求："qPCR studies require amplification plots, primer efficiencies (R²≥0.98), and gel electrophoresis of PCR products. Data from ≥3 independent experiments must be shown."
　　来源：JBC Editorial Policies
　　关键要求：扩增曲线图+产物电泳图；线性回归系数R²≥0.98
　　4. 《细胞与分子免疫学杂志》
　　原文要求：&#34;RT-qPCR需提供内参基因名称、引物序列、退火温度及循环数。数据须基于≥3次独立实验，并标注统计学差异（*p<0.05, **p<0.01）。&#34;
　　参考链接：投稿指南
　　关键要求：独立实验次数明确；统计学显著性标注
　　5. 《中国细胞生物学学报》
　　原文要求：&#34;PCR数据需包含引物序列、退火温度、产物大小及电泳图。定量结果需提供原始Ct值及标准化方法。&#34;
　　来源：作者指南
　　关键要求：凝胶电泳验证产物特异性；原始数据可追溯（如Excel表格）
　　6. 期刊特殊要求对比表



　　二、PCR实验初期合规设计指南
　　1. 实验设计阶段


　　2. 数据采集规范
　　必需参数：① 扩增效率：90–110%（计算方式：*E = [10^{(−1/slope)} − 1]×100%*）② R²值：≥0.98（标准曲线线性度）③ Ct值变异系数（CV）：技术重复间<0.5
　　3. 核心经验总结
　　数据可重现性：① 保存所有原始数据（仪器导出文件、凝胶图原始照片）。② 记录试剂批号与仪器型号（如Applied Biosystems 7500）。
　　MIQE清单自查：① 使用MIQE指南清单核对26项必填信息。② 重点检查：RNA质量（RIN≥7）、cDNA合成方法（含gDNA去除）。
　　中文期刊特殊要求：① 提供伦理委员会批准编号（涉及人类/动物样本）。② 引物序列需标注合成公司。

　　三、常见问题与详细解决方案
　　1. 常见问题及解决方法


　　2. 投稿前终极检查清单
　　① 引物信息：序列、浓度、退火温度、扩增产物大小
　　② 验证文件：熔解曲线图、标准曲线图、电泳图
　　③ 统计数据：ΔΔCt计算过程、ANOVA分析结果、个体数据点
　　④ 伦理声明（如适用）：批准编号、遵守《赫尔辛基宣言》
　　重要提示：Nature/Cell期刊可能要求提供qPCR仪原始输出文件（如.eds或.rdml格式），建议使用RDML标准格式保存数据。
　　通过严格执行上述指南，可显著提升稿件接收率，并确保实验结果的可重复性与学术诚信。

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