LB液体培养基怎么做?

乔帮主

有没有大佬帮忙看看大后天考试的实验大纲 完全没接触过这个 帮忙讲解一下 也可以有偿 拜托拜托



原文地址：https://www.zhihu.com/question/650597754

感恩由您

一、LB培养基的配制：
成分
胰蛋白胨(tryptone)：10g
酵母提取物(yeast extract)：5g
氯化钠(NaCl)：10g
固体培养基另加 琼脂粉 15-20g
加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min

二、配制方法
（1）称量：分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。
（2）溶化：加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使其全部溶化。
（3）调pH：用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。
（4）定容：将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。
（5）加琼脂：加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。
（6）分装、加塞、包扎。
（7）高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

大力水手

根据提供的实验大纲，配制100mL LB液体培养基的步骤如下：
1. 选择所需的器皿和工具：
   - 准备烧杯（200-500Ml）、量筒(100Ml)、锥形瓶(250ml)和天平(千分之一的就行)。（找器皿，需要认识，）
   - 确保所选器皿和工具适合进行液体培养基的配制。
2. 检查器皿：
   - 仔细检查玻璃器皿是否有破损或污渍，确保器皿干净且适合使用，尽量干净，不干净的洗一洗。
3. 调整天平：
   - 正确调整天平，旋转天平底部的螺栓，将天平的平衡气泡调整到最中间，确保称量过程的准确性。
4. 计算药品用量：
   - 根据培养基配方计算各成分的用量。
   - 对于100mL LB液体培养基，通常需要胰蛋白胨1g，NaCl 1g，酵母提取物0.5g。
5. 取药手法：
   - 正确拿取药瓶，确保操作过程中药品不受污染。瓶盖内部朝上。

6. 药品称量：
   - 使用天平准确称量所需的各种成分。称量勺要干净，不要混用，称量一个洗一次，擦干。
   - 确保称量过程熟练、准确，数值误差控制在±0.05g以内。多出来的部分扔了，不要倒回去。
7. 药品溶解：
   - 将称量好的药品按顺序加入到适量的蒸馏水中。先加60-70ml水.
   - 使用玻璃棒辅助溶解，确保药品完全溶解。
8. 调整pH值：
   - 选择合适的pH试纸或试剂，根据需要调整培养基的pH值至适宜范围。然后定容到100ml。
9. 培养基分装：
   - 将溶解好的培养基分装到锥形瓶中，注意不要超过容积的1/2。
10. 锥形瓶加塞：
    - 熟练正确地为锥形瓶加上塞子，确保瓶塞的长度适宜，便于后续的培养操作。
11. 标记培养基名称、配制日期、配制人：
    - 使用记号笔在标签纸上清晰地注明培养基的名称、配制日期和配制人。
    - 将标签贴于锥形瓶壁上，以便于识别和记录。
12. 清洗和清场：
    - 清洗所用的器皿和工具，确保下次使用时干净无污染。
    - 将所有使用过的工具和器皿归位，保持实验台面的清洁。

感恩由您

看着步骤多，实际上很简单，用六个字形容一下：按照菜谱炒菜。
炒菜需要炒锅、铲子、刀、案板等工具，买菜、洗菜、切菜等步骤，还要调味品等等。只不过配制培养基过程中，尤其是考操作题，需要每一个步骤都到位，根据表单一一解释一下。
序号1
（1）配制100mLLB培养基，选择150mL、200mL烧杯，50mL、100mL量筒，按照需要拿取锥形瓶，分析天平（不清楚考试是不是砝码天平）。
（2）选好玻璃器皿，检查玻璃器皿是否破裂，破的换一个，是否干净，不干净洗净。
（3）使用天平第一步：调零。（砝码天平还需要检查砝码）
序号2
LB培养基配方（g/L）：胰蛋白胨10，氯化钠10，酵母提取物5。计算100mLLB配方用量，那就是胰蛋白胨1，氯化钠1，酵母提取物0.5。
序号3
（1）看标签，把胰蛋白胨、氯化钠、酵母提取物拿出来，放到天平一侧。
（2）左手拿试剂，标签朝着手心，右手拿称量勺，称量试剂。
（3）天平调零后，拿称量纸（折一下，倒试剂方便），称好一个先倒入烧杯中，继续下一个。尽量倒到锥形瓶底部，不要沾瓶口。
序号4
（1）先加50mL蒸馏水
（2）用玻璃棒搅拌
（3）直至全部溶解，用量筒粗略定容，加入剩余蒸馏水，搅拌均匀
序号5
LB培养基pH在7.0左右，可以选择5.0-9.0的pH试纸
序号6
确定好分装几瓶，用量筒量取，用引流法加入锥形瓶中，不要沾到瓶口，加入的体积不能超过锥形瓶容积的1/2。
序号7，序号8和序号9
不用解释，照做就行。