如何选抗体！！！刚刚接触western blot的同学~还不会选择抗体的小伙伴快来看看啦，教你如何挑选抗体！！！

非诚勿扰孟非

一抗的选择

（一）目的蛋白的信息
        选择我们需要且可用的抗体抗体首先我们要明确我们想要检测的目的蛋白与抗体识别蛋白信息是否吻合，注意中英文名字、别名等信息。某些蛋白具有多种不同的亚型，这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域，是可以同时识别多个亚型的。
（二）抗体应用的实验类型
        其次我们要确定的就是我们需要抗体去做哪些实验，如WB /IHC /ICC /ELISA等，抗体在官网上或者说明书都列出该抗体经验证适用于何种分析类型，如果抗体说明书没有说明提及的应用类型，则意味着该抗体不适用于标明以外的应用，或该抗体未经验证。例如：你需要做WB和石蜡切片的免疫组化则需要选择抗体标明WB和IHC-P，如该抗体只标明了WB或IHC-P,则不建议选择。
（三）实验样本的种属信息
        抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证，以确定可以满足的不同种属类型，可以在产品说明书的Species-Reactivity一栏中看到（如人、小鼠、大鼠等）。通过验证，达到质检要求的种属会明确标记，以备参考。没有做过关于这些种属的实验，所以不建议使用。
（四）单抗和多抗的选择
        在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高。
二抗的选择

（一）一抗的来源种属
主要根据一抗来源种属而决定二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可。
（二）二抗应用的实验类型
针对不同的实验应用，需要考虑二抗所偶联的标记物，如HRP、Biotin、荧光素等标记物。WB与IHC所用的二抗，所带的标记物主要选择HRP和Biotin，而免疫荧光和流式应用可根据实验设计的需要，选择不同荧光素标记的二抗，如FITC、Cy3、PE等。做western blot最常用的二抗是hrp标记的二抗！！！



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