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核酸提取方法多,因物制宜别选错
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发表于 2025-4-13 12:00
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“你做核酸了吗?”
疫情连绵,这句话已经变成了大家日常的问候语,相信大家不是正在做核酸,就是在去做核酸的路上,个别地方的小伙伴们可能就像网上调侃的,嗓子都快捅出茧了。但是可能很多小伙伴不知道我们做咽拭子或者鼻拭子是为了什么,是为了采集我们咽喉部及扁桃体的分泌物和上皮细胞,并且提取其中的核酸进行PCR检测。迅速、规范的提取核酸是关键中的关键,那么核酸怎么提取呢?看了下面你就知道啦!
核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),是分子生物学研究的主要对象。提取完的核酸首先要保证核酸一级结构的完整,还有就是尽量纯,降低蛋白质、多糖和脂类等大分子含量,去掉对酶有抑制作用的有机溶剂、金属离子等。目前比较常见的核酸提取方法有
①热裂解法,这个方法在新冠核酸检测中也发挥了极大的作用。这种方法就是使用核酸释放剂或裂解液(SDS、Tween 20等),95℃以上加热10min,使得样本中的待测物从与其他物质结合的状态中释放出来,产物直接进行PCR检测即可。整个操作在一个反应管进行,操作简便,减少误差,一般用于血清、体液等病原体核酸的提取。但是这样提取核酸浓度和纯度都不太高,只能用于PCR检测,不能用于其他要求更为严苛的分子学研究。
②磁珠法,这种方法利用磁性颗粒活性基团可以与核酸结合和解离的特性,使用细胞裂解液裂解细胞后,利用磁珠吸附游离的核酸,再经过数次洗涤和吸附,得到较为纯净,品质较高的核酸。自动化程度高,操作也比较简单,虽然成本相对高一点,但是也大大节约了操作员的精力与时间。
③柱提法,适合快速从组织、血液、分泌物、排泄物等样品中提取高纯度的包含病毒,细菌及寄生虫等生物的总核酸。其利用特殊硅胶基质吸附材料,可以特异性的吸附核酸,而略过蛋白质等大分子产物,最后再将核酸在吸附膜上洗脱下来,即可得到样品核酸。这样提取到的核酸虽然量不太大,但是已经经过纯化,质量较高,在目前应用较为广泛。
④Trizol法,这种方法是提取RNA较为经典的方法。研磨动植物组织时或之后加入Trizol试剂,这样可以保持RNA的完整。然后加入氯仿离心,液体分层,而RNA就存在于水相层,经异丙醇沉淀回收后用乙醇洗涤,即可得到RNA。这种方法成本低,适用样品种类广泛。但是对操作者手法要求较高,步骤繁琐,耗时长,RNA易降解,学术科研上应用较广。
当然,除了以上四种,还有煮沸裂解法,浓盐法、酚氯仿法等等,大家可以根据自己的需求选取适合自己的核酸提取方法。三狮生物的总DNA、RNA提取试剂盒(柱提法),核酸提取试剂盒(磁珠法)、动物基因组DNA快速提取试剂盒(PCR分析用)等多个种类、多种规格的核酸提取试剂盒,总有一款适合你。另有全自动核酸提取纯化仪,搭配使用省时又省力,让你轻轻松松搞科研!
原文地址:https://zhuanlan.zhihu.com/p/567558007
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