Western blot | 条带问题如何解决？

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WB，蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
蛋白实验虽然简单，但是条带容易出现的问题极多，下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧！
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沐沐么么哒楼主
发布于 2022-04-11IP 河北

这个帖子发布于 1 年零 136 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
WB，蛋白质印迹(Western blotting)又称免疫印迹(immunoblotting)，是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。
蛋白实验虽然简单，但是条带容易出现的问题极多，下面来分享一下不同条带的原因和解决办法吧！

条带弱、信号弱的原因？

• 抗体和抗原亲和力较低
  
• 一抗二抗稀释度过高
  
• 上样量、转膜不充足
  
• ECL曝光时间过短
  
• 封闭液选择不当
  

解决办法

• 降低一抗、二抗稀释度；降低洗膜次数；
  
• 降低一抗、二抗稀释度，优化实验条件；
  
• 增加上样量；优化电转条件，使用丽春红或者考马斯亮蓝染胶检测转膜效果；
  
• 增加曝光时间；
  
• 降低脱脂奶粉浓度，或者更换封闭液。
  

杂带较多的原因？

• 一抗或者二抗浓度偏高
  
• 细胞传代次数过多，蛋白表达不同
  
• 上样量过高
  
• 样本处理过程中目的蛋白发生降解加入蛋白，酶抑制剂
  

解决办法：

• 使用经亲和纯化的一抗，尝试梯度稀释，优化实验条件，使用多肽封闭做对照；
  
• 使用原代细胞株，和现在的细胞株一起做参照；
  
• 太敏感适当减少上样量；
  
• 样本处理时在冰上操作。
  

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/652347860