质谱在中药方法学考察中的应用方向整理

非诚勿扰孟非

1. 质谱在中药方法学考察中的应用方向
成分鉴定与结构解析：通过高分辨质谱（HRMS，如LC-Q-TOF、Orbitrap）对中药复杂体系中的化学成分（如黄酮、生物碱、皂苷等）进行快速鉴定。
定量分析：利用三重四极杆质谱（LC-MS/MS）对目标成分（如毒性成分、活性成分）进行精准定量，确保含量符合标准。
代谢组学研究：分析中药体内外代谢产物，阐明药效物质基础及作用机制。
质量控制与标准化：建立基于质谱的指纹图谱或多成分定量方法，结合化学计量学实现中药整体质量控制。
2. 中药方法学考察的核心内容（结合质谱特点）
(1) 专属性（Specificity）
定义：指分析方法能够准确测定目标成分，而不受其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）干扰的能力。
称取50 mg样品，制备供试溶液（共制备7份，另6份用于步骤8），进样查看峰面积，确定合适的稀释倍数。合适稀释倍数的样品的EIC可以与标准品中间点的放在一起，用做专属性考察的结果。
(2)线性关系和检测限、定量限考察
线性：指分析方法的测定结果与被测物浓度成正比关系的范围。
检测线：指能够可靠检测到的最低浓度或最低量。
定量限：指能够可靠定量测定的最低浓度或最低量。
标准曲线建立：通过梯度浓度的标准品溶液建立质谱响应（峰面积/峰高）与浓度的线性关系，确定定量下限（LLOQ）和检测下限（LOD）。
配制对照品的混合溶液（需要根据上一步的结果，确定对照品混合的数量），浓度依次为1000 、500、200、100、50、20、10、5、2、1、0.5、0.2、0.1 ng/mL，可根据实际情况决定是否继续向下稀释（用于确定线性关系、检测限和定量限）。

(3)精密度实验
定义：指在相同条件下多次测定结果的重复性。
日内/日间精密度：通过重复进样（同一天及不同天）评估质谱方法的稳定性，考察保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差）。
根据标准曲线的线性范围确定低、中、高精密度和准确度实验的浓度。各浓度点连续进针6次，以6次结果峰面积的RSD值考察精密度，以6次结果与配制浓度的比值考察准确度。
（4）重复性实验
定义：指在相同条件下，多次测定结果的重复性。
样品制备重复性：考察提取方法（如超声、回流）对质谱分析结果的影响。

取稀释倍数略区别于步骤6的供试品溶液（如可100 μL加入15μL水），连续进针6次，考察重复性。

(4)加样回收率实验
定义：在已知含量的样品中加入已知量的标准品，测定回收率。
加标回收实验：在样品中添加已知浓度的标准品，通过质谱测定回收率（通常要求80%~120%）。
称取150 mg，制备6份供试品溶液，加入一定浓度的对照品溶液（需要根据样品含量确定，不能超出标曲上限），分别测定供试品溶液和对照品溶液的浓度，计算加标回收率和RSD值。
内标法校正：使用同位素内标（如²H、¹³C标记物）减少基质效应和仪器波动带来的误差。
(5) 稳定性实验

定义：指样品在不同条件下（如时间、温度、光照等）保持其物理和化学性质不变的能力
样品稳定性：考察不同保存条件（如室温、4℃、冻融循环）下目标成分的质谱响应变化。
取同一供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24h后测定，以7次结果的RSD值考察稳定性。
仪器稳定性：验证质谱系统在长时间运行中的信号漂移情况。

3. 中药质谱分析的特殊挑战与对策
基质复杂性：中药提取物中高浓度多糖、鞣质等可能抑制离子化，需优化前处理（如固相萃取、稀释）或采用稀释后直接进样（DDA）。
成分间干扰：利用高分辨质谱的分离能力（如Orbitrap的100,000+分辨率）区分同分异构体或质量数相近的化合物。
标准品缺乏：针对未知成分，采用半定量或相对定量策略，或通过合成类似物建立替代标曲。

通过系统的方法学考察，质谱技术可显著提升中药质量控制的科学性和国际化水平，助力中药现代化研究。

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