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[分享] 真核过表达目的蛋白WB检测不到如何解决?

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发表于 2025-3-15 19:28 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2025-3-15 19:28 | 显示全部楼层

FLAG标签蛋白快速检测试剂盒
德泰生物FLAG标签蛋白快速检测试剂盒利用侧向层析免疫检测技术,可快速定性检测细胞培养上清、细胞/细菌裂解产物或纯化后的FLAG标签蛋白。检测时,仅需将试纸条加样区按箭头指示加入样品中,或吸取少量样品加至试纸条加样区,等待10分钟,即可读取检验结果。
产品优势

· 快速:仅需10分钟即可完成检测
· 准确:结果与其他抗体免疫检测相似
· 操作简便:细胞培养上清、细胞/细菌裂解产物样品无需稀释,无需其他仪器设备
· 重复性好:批内、批间检验结果、显色度一致
使用场景

1.判断FLAG标签融合蛋白是否表达
2.蛋白表达过程中优化蛋白表达诱导时间
3.蛋白纯化过程中检验各个洗脱组是否含有目标蛋白
检验原理

本品采用胶体金免疫层析法原理快速定性检测细胞培养上清、 裂解液或蛋白纯化后的 FLAG标签蛋白。


检测时,样本在毛细效应下层析。如被检样本中不含FLAG标签蛋白时,则结合垫上的金标抗FLAG标签抗体与固定在检测线处的FLAG标签蛋白结合形成“Au-抗FLAG标签抗体-FLAG标签蛋白”复合物,从而在检测线(T线)出现一条红色条带;如被检样本中含有FLAG标签蛋白时,则FLAG标签蛋白与金标抗FLAG标签抗体结合形成“Au-抗FLAG标签抗体-Flag标签蛋白”复合物,未反应的金标抗FLAG标签抗体会与检测线(T线)上的Flag标签蛋白反应,T线出现一条红色条带,随着被检样本中FLAG标签蛋白含量的增加,T线显色逐渐减弱,直至完全不显色。无论被检样本中是否存在Flag标签蛋白,金标鸡IgY都会向上层析至控制线(C),与羊抗鸡IgY反应出现一条红色条带。控制线(C)所呈现的红色条带是判断层析过程是否正常的标准。
检验方法

1. 取出试纸条,平衡至室温;
2. 可将试纸条按箭头指示插入样品中,或者吸取75 μL样品添加至试纸条加样区,加样时注意不要产生明显气泡,计时器记时,10 分钟判读结果。
检验结果判定

1.阴性结果:质控线C和检测线T都出现红色条带。
2.阳性结果:质控线C出现红色条带,检测线T不出现红色条带。
3.无效结果:质控线C不出现红色条带。


试剂盒使用常见问题

Q:使用FLAG标签蛋白快速检测盒样品检测的最佳浓度是多少?
A:≥1ug/mL。
Q:使用FLAG标签蛋白快速检测盒是否需要设立对照?
A:为了结果的准确性,须设立阴性对照和阳性对照(建议对照样品与待测样品为同基质)。
Q:不同样品检验后检测线T显色深浅不一,是什么原因?
A:样品中不含FLAG标签蛋白时,检测线T显色最深,随着样品中FLAG标签蛋白含量的增加,检测线T显色逐渐减弱,直至显色消失。
Q:是否可以使用FLAG标签蛋白快速检测盒样品进行定量检测?
A:本试剂仅对样品中的FLAG标签蛋白提供定性检测。
<hr/>更多产品

德泰生物标签蛋白快速检测试剂盒
产品名称货号规格
His标签蛋白快速检测试剂盒DTT0110 tests
FLAG标签蛋白快速检测试剂盒DTT0210 tests

德泰生物标签抗体
产品名称货号种属规格
His标签抗体DTH01Mouse100μg / 500μg / 1000μg
His标签抗体DTH02Rabbit100μg / 500μg / 1000μg
GST标签抗体DTG01Mouse100μg / 500μg / 1000μg
GST标签抗体DTG02Rabbit100μg / 500μg / 1000μg
Flag标签抗体DTF01Mouse100μg / 500μg / 1000μg
Flag标签抗体DTF02Rabbit100μg / 500μg / 1000μg
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发表于 2025-3-15 19:29 | 显示全部楼层

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发表于 2025-3-15 19:29 | 显示全部楼层
不太了解这个质粒具体情况和你是怎么插入目的基因的,但是首先,如果是空载体是否会表达GFP?如果会那就很好理解了,如果不会的话WB用的抗体是否针对你选用的目的蛋白的片段?能否用GFP抗体再试一次?
然后你是否做过RT-PCR或类似实验确认过mRNA表达情况?
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