金桔
金币
威望
贡献
回帖0
精华
在线时间 小时
|
以下是Aktaprime plus蛋白层析仪的一般使用步骤:
开机前准备
溶液和样品准备:所有工作溶液和样品需经0.45μm滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。若缓冲液含有机溶剂,需用低频超声脱气10min 。
检查仪器:确保仪器各部件连接正常,无松动或损坏。
开机
打开仪器主电源,再打开电脑电源,待仪器自检完毕。
双击桌面上的UNICORN图标,进入操作界面。
清洗及管道准备
将A1管道放入缓冲液或平衡液中,B1管道放入高盐溶液或洗脱缓冲液中。
在system control窗口点击工具栏内的manual,选择pump→pump wash basic,选中A1、B1管道为ON,execute。
安装层析柱
在manual里选择pump→flow rate,输入流速1ml/ml,insert。
选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm,insert,execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
开始纯化
柱子平衡:等待柱子平衡好,观察电导COND、pH数值和变化趋势,此时将紫外调零,选择Alarm&mon→autozero,exectue。
上样:有两种方式,一是用样品环上样,将样品吸进注射器,推掉气泡,从injectionValve的3号位推入;二是用泵上样,点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线,在manual里选择pump→gradient,按照自己的工艺选择targetB和length 。
设定收集:选择Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900,exectue。
清洗泵及卸下层析柱
将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。
再将A1和B1入口放入20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。
给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头,整个过程防止气泡进入。
关闭电源
从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能单独关闭。
关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源。 |
|