Western blot常见异常条带分析

balabala

点击上方蓝字关注我们
Western blot常见异常条带分析
   对于所有接触分子生物学实验的同学来说，western blot可谓是必备技能之一。不管你是在体或者体外实验，想要知道你的药物或者某个基因是否起作用，我们最终都要看某个蛋白质的表达变化。因此，一篇优秀的Aarticle必然要有一个漂亮的western blot条带。
   但想要一个非常完美的条带可真是难上加难，整个western blot实验步骤太繁琐，一步出错或者没有按照规定的要求完成就不会有完美的结果。
   所以，今天我们来汇总一下在平常western blot实验过程中所遇到过的“诡异”条带。
1
无条带或条带不完整







2
高背景



高背景是指目的条带可以看到 ，且目的条带单一，但其他地方也有弥散的条带（连续的）。



3、非特异性或者弥散性条带







4、条带歪，不整齐







5、“微笑”条带





6、拖尾条带





7、内参问题
      内参的选择



有文献报道称，总蛋白上样量超过10 μg时内参蛋白不够敏感，无法检测到差异，所以一般情况下内参的理想上样量为大约5μg。对于目标蛋白的上样量，其理想的上样量为为10-20μg：
为了达到数据标准化的目的，现在诸多SCI期刊审稿人要求每个目标蛋白条带同一张膜上均需孵育内参。
关于内参不齐？？？
1、样品问题   
可以试一试用同一个样品交换一下上样顺序
2、转膜时的问题
转膜时有没有压紧，夹子夹的时候一边紧一边松
3、膜是不是太干
在奥德赛扫描或者ECL显影时，膜的一部分太干
4、测蛋白浓度，确定上样体积
这样做的目的可以很好的避免内参不齐，另外，在加loading buffer时，由于太粘稠，一定要确保加的体积正确。补加的RIPE也要体积正确。
5、确定你的目的蛋白没有降解？？？
更多精彩内容，请关注微信公众号：药学杂货铺

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/151405723