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[分享] DNA提取过程中各种试剂的作用及原理是什么?

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发表于 2025-3-13 11:48 | 显示全部楼层 |阅读模式
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发表于 2025-3-13 11:48 | 显示全部楼层
DNA提取是将细胞或者病毒内的DNA分离纯化出来,主要涉及
1.裂解细胞或病毒
2.洗涤
3.沉淀再溶解
1.裂解:去污剂(SDS等)破坏细胞膜和蛋白酶k消化蛋白以破坏细胞和核膜,让DNA释放出来,同时蛋白酶k还可以破坏核酸酶,防止DNA降解。胍盐可以使蛋白变性,组蛋白与DNA分离。
2.洗涤:乙醇溶液可以洗涤去除盐离子,还有去除蛋白质等杂质,沉淀DNA
3.DNA沉淀再溶解:一般是TE缓冲液(Tris-EDTA buffer),这个有助于DNA的稳定
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发表于 2025-3-13 11:48 | 显示全部楼层
威震乾坤第一功,辕门画鼓响咚咚。云长停盏施英勇,酒尚温时斩华雄。——《三国演义》
自古以来,万军之中取上将首级,就被誉为是勇武过人的大将。DNA的提取比这个还要刁钻,不是要上将的首级,而是要抓活的。有点赵云七进七出,不是救出来阿斗,而是带着曹操出来了,曹操在马后面坐着,还对着赵云撒娇,“哥哥,哥哥,你骑马带着我,你家主公不会生气吧,好可怕,不像孟德,孟德只会心疼哥哥”——说回来,也就是提取出来的DNA,不能是双链打破的,那都成了单链,或者碱基了,那不行。要的是双链DNA。这样才能继续后续的PCR或者测序等其他实验。
那么,要把DNA提取出来,总共分几步?
三步!第一步,把冰箱门打开......不好意思,是这三步:
DNA深深隐藏在细胞核的内部,当然细胞质里面也有部分,深居其中,如何才能“活捉”他呢
第一步:打破阵型,冲破大军;
第二步:杀散虎豹骑(虎豹骑是曹操的贴身侍卫);
第三步:带回大营,而且不允许曹操坐在后面撒娇。


我来翻译翻译:
第一步:裂解细胞,破坏细胞膜,打破对方阵营完美的阵型,通常会用到的

  • 离子去污剂,比如SDS;
  • 离液剂,如胍盐
  • 与离子去污剂结合的碱;
第二步:去除与DNA紧密结合的组蛋白,即打散曹操贴身护卫虎豹骑,通常的做法有:

  • 酶水解蛋白和RNA;
  • 从层析液中吸收和释放DNA;
  • 利用有机溶剂,如苯酚或氯仿。
第三步:安全带回曹操到大本营,活的。也就是把DNA沉淀了。通常使用乙醇或者异丙醇。
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发表于 2025-3-13 11:49 | 显示全部楼层
请自行搜索碱裂解法~
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