western blot显影显不出来是什么原因？

莺歌燕舞

我的蛋白C端带有一段flag，用Flag抗体就能孵育出来，但是用目标抗体就显不出来条带是咋回事呢？我用抗体已经有20μg/mL了。

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卡卡

先确定二抗和显色液有没有问题，如显色液是否正常，二抗效价是否合适，二抗和你抗体是否配对，例如抗体是鼠源IgG抗体，二抗是兔抗鼠等，这些都没问题的话可能就是你目的蛋白和抗体不结合，可能是该抗体针对目的蛋白空间结构，WB中蛋白变性失去空间构象，就结合不上，而你说的C端标签一般比较小，抗体针对的是线性表位，比如HIS标签